Determinación de los niveles de cobre en líquido oviductal bovino y su efecto sobre la motilidad lineal progresiva de los espermatozoides y la integridad del acrosoma

ANCHORDOQUY JM; NIKOLOFF N; MIGLIORISI L; PASCUA AM; ANCHORDOQUY JP; FABRA M; FURNUS C

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Congreso; 3 ° Congreso Internacional de la Sociedad Argentina de Tecnologías Embrionarias; 2016

El cobre (Cu) es un mineral esencial presente en todos los tejidos. Sin embargo, no se conoce la concentración de Cu en el líquido oviductal (LO) de bovinos ni el rol que este mineral desempeña en la fecundación. El objetivo de este trabajo fue determinar la concentración de Cu en el LO y su efecto sobre la motilidad lineal progresiva (MP) y la integridad del acrosoma (InA) de los espermatozoides. Se tomaron muestras pareadas de sangre y oviducto de vaquillonas al momento de su sacrificio en el frigorífico. Para obtener el LO se introdujo una pipeta estéril dentro de la ampolla y se insufló con aire varias veces. El líquido fue obtenido a nivel de la unión útero-tubárica mediante una suave presión de las paredes oviductales. Las muestras de LO se agruparon en 5 pooles teniendo en cuenta para ello la cupremia de los animales: 40-59, 60-79, 80-99, 100-119 y 120-140 µg/dl de Cu en plasma. Cada pool fue centrifugado a 5000 g x 10 min. La concentración de Cu en LO, medio TALP y plasma fue medido por espectrofotometría de absorción atómica. Los espermatozoides vivos obtenidos a partir de semen congelado de bovino fueron separados mediante un gradiente discontinuo de Percoll. Luego, los espermatozoides fueron incubados en medio TALP con 0 (Control), 20, 40 y 60 μg/dl de Cu a 39°C en 5% CO2 en aire. La MP y la InA fue evaluada a las 0 h y 3 h de incubación. La MP fue evaluada con el método subjetivo. Para ello, se tomaron 10 µl de semen que fue colocado sobre un portaobjetos precalentado y cubierto con un cubreobjetos. Se analizaron tres campos por muestra con un microscopio óptico de contraste de fase. La InA fue evaluada utilizando la lectina PSA-FITC (Pisum sativum aglutinina marcada con isotiocianato de fluoresceína). Se contaron un total de 200 espermatozoides por muestra bajo microscopio de fluorescencia. La concentración de Cu en LO fue analizada usando un modelo lineal con el procedimiento MIXED de SAS. La MP y la InA se analizaron mediante regresión logística usando el procedimiento GENMOD de SAS. No se observaron diferencias en la concentración de Cu del LO medida en los diferentes grupos (37.5 ± 7, 41.2 ± 9, 42.9 ± 9, 36 ± 4 y 30 ± 7 µg/dl de Cu en LO para 40-59, 60-79; 80-99; 100-119 y 120-140 µg/dl de Cu en plasma respectivamente). No hubo correlación entre la concentración de Cu en LO y plasma (r= 0.44; R2 = 0.20). Luego de 3 h de incubación, la MP fue similar en los espermatozoides tratados con 0 (33%) y 20 µg/dl Cu (33%) sin embargo, fue mayor en los tratados con 40 y 60 µg/dl Cu (40% y 40%, respectivamente; p < 0.05). La InA fue similar en los distintos grupos (62.5%, 59%, 56.5% y 57.5% de espermatozoides con acrosoma intacto para 0, 20, 40, y 60µg/dl de Cu, respectivamente). En conclusión, la concentración de Cu en LO siempre se mantuvo cerca de los 40 µg/dl independientemente de la cupremia. La suplementación con 40 y 60 µg/dl de Cu al medio TALP mejoró la MP luego de 3 h de incubación.