Desarrollo de un método de genotipificación del gen bovino DGAT1 basado en pirosecuenciación.

RIPOLI MARIA VERÓNICA; ROGDBER MUÑOZ ANDRÉS; LIRÓN JUAN PEDRO; POSIK DIEGO M.; GIOVAMBATTISTA GUILLERMO

Tandil

Congreso; XXXVII Congreso Argentino de Genética; 2008

Sociedad Argentina de Genética

La enzima Diacilglicerol acil transferasa 1, codificada por el gen DGAT1, participa en la síntesis de triglicéridos y ha sido asociada con contenido de grasa en leche y marmoleo en diferentes razas bovinas. Diversos métodos (PCR-RFLP y PCR-SSCP) han sido desarrollados para tipificar el polimorfismo K232A ubicado en dicho gen. Estas metodologías manuales no permiten su automatización y limitan el número de animales analizados. El objetivo del presente trabajo consistió en desarrollar un método para tipificar la mutación K232A del gen DGAT1 basado en la tecnología de pirosecuenciación. Esta técnica de alta performance se basa en la detección del pirofosfato liberado durante la polimerización del ADN. Se diseñaron dos primers externos para la amplificación por PCR y un primer interno adyacente a la mutación para la reacción de pirosecuenciación. El producto de amplificación de 300 animales se purificó mediante sílica utilizando la plataforma de trabajo provista por el equipo PSQ 96MA en el cual se realizó la reacción de pirosecuenciación. Los resultados se analizaron con el programa PSQ 96MA 2.1.1. La técnica fue validada mediante la tipificación de muestras de ADN previamente analizadas por PCR-SSCP y secuenciación directa. Dado que la pirosecuenciación es un método de tipificación rápido, de alta fidelidad y que permite el análisis de un polimorfismo a gran escala, resulta de gran utilidad para estudios de asociación. Además, se dispone de esta metodología para procesos de selección a nivel comercial en bovinos.