Verificación de la norma ISO 13136:2012 para la detección de Escherichia coli productor de toxina Shiga no-O157

GENTILUOMO J; FIGUEROA F; SEBASTIAN S; BUFFONI M; GHISOLFI A; SUCARI A; LEOTTA GA; GRISARO A; COSTA M

Congreso; XXIII Congreso Latinoamericano de Microbiología. XIV Congreso Argentino de Microbiología.; 2016

Introducción: Escherichia coli productor de toxina Shiga (STEC) es un patógeno emergente asociado a enfermedades transmitidas por alimentos y en los últimos años se incrementó la detección y aislamiento de STEC no-O157 en alimentos debido a presiones regulatorias. Los alimentos son incubados en caldos selectivos para favorecer el desarrollo de STEC y luego se utiliza PCR en tiempo real para la detección de los genes stx y eae a partir de estos caldos de enriquecimiento. El sistema GeneDisc (Pall Corporation) posee kits validados para la detección de estos genes, considerándose una herramienta eficaz para el tamizaje. El objetivo del trabajo fue verificar la implementación de la norma ISO 13136:2012 para la detección de STEC no O157, utilizando el quipo GeneDisc para el tamizaje de stx y eae por PCR en tiempo real. Se utilizó carne picada cruda como matriz, la cual fue analizada para determinar que no estaba contaminada con STEC. Un total de 25 muestras fueron contaminadas experimentalmente, de las cuales 12 fueron contaminadas con E. coli O79:H19, E. coli O116:H21, E. coli O174:H21, E. coli O8:H19, E. coli O130:H21, E. coli O91:H2, E. hermanii, E. coli, P. mirabilis, C. freundii, S. Enteritidis y E. coli ATCC 25922 (100-1000 ufc/g de carne picada); 8 fueron contaminadas con STEC O111:NM, STEC O26:H11, STEC O121:H19 y STEC O145:NM con dos concentraciones bacterianas (10-100 y 100-500 ufc/g de carne picada). Cinco muestras fueron utilizadas como blanco. Los analistas procesaron todas las muestras según la norma ISO 13136:2012 sin conocer con que habían sido contaminadas. Luego del enriquecimiento en caldo selectivo se realizó la detección de los genes stx y eae con el sistema GeneDisc. Las muestras positivas a los genes stx fueron analizadas por cultivo confirmatorio según la norma ISO 13136:2012. Como control positivo se utilizó STEC O26 y control negativo sin inóculo bacteriano. El rango de trabajo obtenido fue de 1 a 23 UFC/g de alimento por lo que el límite de detección fue 1 UFC/g de alimento. Una de las muestras blanco presentó un resultado falso positivo por el método de tamizaje por PCR, la cual fue negativa al realizar el cultivo confirmatorio. Por lo tanto, se obtuvo 100% de sensibilidad y 100% especificidad. Se verificó la aplicación de la norma ISO 13136:2012 en un laboratorio de microbiología de los alimentos en Argentina.