Análisis de la citotoxicidad del antibiótico enrofloxacina en células de hamster chino cultivadas In Vitro

VINOCUR F; RESASCO A; ANTONINI AG; SEOANE AI

Casilda

Jornada; XIV Jornadas de divulgación técnico-científicas en Ciencias Veterinarias; 2013

Facultad de CIencias Veterinarias UNR

Los productos farmacéuticos de uso veterinario son ampliamente utilizados para proteger la salud animal Entre ellos los antibióticos son los más ampliamente utilizados tanto en la prevención de enfermedades como en la promoción del crecimiento. La administración de antibióticos a los animales de producción implica la posible presencia de sus residuos en los alimentos (carnes, leche, huevos, miel y subproductos como quesos, mantecas, dulces, grasas alimentarias, etc.) lo cual constituye una preocupación en el campo de la salud pública1 Por otra parte una amplia variedad de residuos han sido detectados en el medio ambiente aumentando la preocupación sobre los potenciales efectos y riesgos que pueden provocar sobre el ecosistema estos productos y sus metabolitos2 La enrofloxacina es uno de los antibióticos mas utilizados en el campo de la medicina veterinaria. Pertenece al grupo de las quinolonas (fluoroquinolona) que son rápidamente bactericidas a muy bajas concentraciones; su principal mecanismo de acción es la inhibición de la ADN girasa, una enzima bacteriana involucrada en la mayoría de los procesos biológicos que comprometen al ADN (transcripción, recombinación, replicación y reparación. Tiene buena actividad contra bacterias Gram- y Gram+, incluyendo algunos anaerobios patógenos y es eficaz contra Mycoplasma spp, por lo que es utilizada con frecuencia para el tratamiento de enfermedades infeccionas del tracto digestivo y aparato respiratorio en aves de corral, bovinos, porcinos, caprinos y otras especies3 Los animales tratados con esta droga pueden acumular residuos del antibiótico y/o sus metabolitos en carne, leche y huevos. Con la finalidad de evaluar el potencial efecto citotóxico de enrofloxacina, se desarrolló la técnica de Índice Mitótico en células CHO (originarias de hamster chino) cultivadas in vitro. Las células CHO fueron cultivadas en monocapa en frascos Falcon utilizando un medio de cultivo Ham F10 suplementado con 10% de suero bovino fetal y antibióticos (penicilina 60 UI y estreptomicina 50 g/ml). Como primer paso se realizaron las diluciones de la droga a utilizar partiendo de enrofloxacina al 5%. (Floxagen) obteniéndose una solución en agua destilada (ST1= 20mg/ml). Las células fueron tratadas con distintas concentraciones de enrofloxacina para llegar a las siguientes concentraciones finales: 50, 100 y 150 µg/ml. Las células se tiñeron con colorante Giemsa al 5% durante 10 minutos. Se cuantificó la cantidad de metafases encontradas sobre un total de 1000 células luego de los tratamientos. Se analizaron estadísticamente los datos a través del test de Chi cuadrado. Los resultados muestran una disminución en la frecuencia de células en división a medida que aumenta la concentración de enrofloxacina: control negativo: 17? ± 0,008; tratamiento 1: 17? ± 0,008; tratamiento 2: 5? ± 0,004; tratamiento 3: 4? ± 0,004. Se observaron diferencias significativas entre el control sin tratar y los tratamientos 1 y 3 (p=0.04 y p=0.003 respectivamente). Los resultados encontrados indican que el antibiótico en estudio posee efecto citotóxico en las condiciones estudiadas y que por lo tanto podría eventualmente ser perjudicial si se encontrara en estas concentraciones en los tejidos animales. Se necesitan nuevos estudios en otros tipos celulares e in vivo para corroborar dicho efecto y para discernir la responsabilidad del solvente utilizado en la formulación comercial en la respuesta encontrada.