IGEVET   21075
INSTITUTO DE GENETICA VETERINARIA "ING. FERNANDO NOEL DULOUT"
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Análisis de la posible asociación entre genes de la respuesta inmune con la Anemia Infecciosa Equina.
Autor/es:
CORBI-BOTTO CM; SADABA SA; LOPEZ RA; GIOVAMBATTISTA G; PERAL GARCIA P; DIAZ S
Lugar:
Casilda, Santa Fe
Reunión:
Jornada; XIV Jornadas de Divulgación Técnico Científica; 2013
Institución organizadora:
Facultad de Ciencias Veterinarias
Resumen:
Análisis de la posible asociación entre genes de la respuesta inmune con la Anemia Infecciosa Equina. Corbi Botto, C. M.; Sadaba, S. A.; Lopez, R.; Giovambattista,G.; Peral García, P.; Díaz, S. Instituto de Genética Veterinaria ¨Ing. Fernando Noel Dulout¨ (IGEVET) CCT La Plata - CONICET. Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional de La Plata. ccorbi@fcv.unlp.edu.ar Una estrategia de estudio de las enfermedades infecciosas en animales domésticos consiste en el análisis del perfil genético del individuo, especialmente en los genes que codifican moléculas que participan en la respuesta inmune. Entre ellas, el factor de necrosis tumoral alfa (TNF-α) y la interleuquina 12 (IL-12), ambos con importantes roles en la regulación de las respuestas inmunes e inflamatorias, así como en la coordinación de la inmunidad innata y adaptativa. En este trabajo se analizaron 4 polimorfismos de nucleótido simple (SNPs)1,2, uno localizado en el exón 6 de la subunidad p40 de IL-12 (IL-12e6) y 3 SNPs presentes en la región del promotor del gen TNF-α. En trabajos previos se investigó el rol de sus variaciones en ciertas enfermedades infecciosas2 y se reportaron diferencias significativas en las frecuencias de los SNPs en distintas razas de caballos2. Una de las enfermedades infecciosas que afecta a caballos es la Anemia Infecciosa Equina (AIE), trasmitida principalmente por picaduras de insectos. Acarrea importantes problemas sanitarios en la industria equina, generando importantes pérdidas económicas y productivas. Los caballos estudiados (N=50) pertenecen a una población de caballos mestizos de la región del Chaco, zona endémica de la Argentina donde conviven tanto animales infectados como no infectados por el virus causante de la AIE. El objetivo de este trabajo fue analizar si existe asociación entre las variaciones en los genes de citoquinas de dicha población y la resistencia/susceptibilidad a AIE. La población fue diagnosticada para AIE mediante el test de Coggins y clasificada según el modelo particular de asociación genética en dos grupos: ?caso? (seropositivos para AIE) y ?control? (seronegativos para AIE). La toma de muestras de sangre entera total con anticoagulante se realizó durante los años 2008 y 2009 en el marco de un proyecto de caracterización genética de los caballos chaqueños y la susceptibilidad/resistencia genética a la infección por AIE. La extracción de ADN se realizó con el reactivo DNAzol® (Invitrogen), y su cantidad y calidad se determinó mediante mediciones en espectrofotómetro NanoVue? (GE Healthcare). El ADN obtenido se utilizó como molde para la Amplificación por Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) y se diseñaron primers específicos para un fragmento del exón 6 de la IL12p40 (IL12e6) y parte del promotor del TNF-α, donde se localizan los SNPs reportados previamente (Hořín et al., 2004)2. La detección del SNP en el exón 6 (cambio A/G) se realizó por medio de digestión del producto de PCR (205pb) con la enzima SscI. Para detectar los SNPs del promotor del TNF-α se utilizó la técnica de Pirosecuenciación. El análisis de diversidad genética y del equilibrio Hardy-Weinberg (EHW) de los marcadores genéticos se llevó a cabo mediante el cálculo de las frecuencias alélicas, la heterocigosis esperada (He) y observada (Ho) y el valor FIS (programa Genepop). Para el análisis de asociación entre estos marcadores y AIE se calculó el índice Odds Ratio (OR) y el valor exacto de Fisher (p-valor) con un intervalo de confianza (IC) del 95%. La composición genética de la población reveló los alelos de IL-12e6 ?IL-12e6-A? (adenina) e ?IL-12e6-G? (guanina) en ambos grupos. Para el promotor de TNF-α sólo se detectaron los haplotipos: TNF-αprom-1 (CTC), TNF-αprom-2 (TTC) y TNF-αprom-3 (CTT) en los dos grupos de caballos. Todos los valores se muestran en la próxima tabla: Gen IL-12e6 TNF-α Frec. génicas EHW Diversidad genética Frec. génicas EHW Diversidad genética Grupo A G p-valor He Ho FIS CTC TTC CTT p-valor He Ho FIS NCH* 0,40 0,60 0,71 0,49 0,55 -0,12 0,55 0,23 0,23 0,08 0,61 0,68 -0,12 PCH* 0,38 0,62 1,00 0,49 0,46 0,06 0,54 0,17 0,29 0,29 0,62 0,58 0,06 Los dos marcadores IL-12e6 y TNF-α en ambos grupos se encuentran en equilibrio Hardy-Weinberg (p-valor>0,05) y no mostraron diferencias significativas entre sí a nivel genético. El análisis de asociación mediante el cálculo de OR y el test exacto de Fisher no mostró valores significativos para la asociación entre los marcadores inmunes analizados y la población en estudio. En vista de la necesidad de identificar los productos de los genes que estén involucrados con el rasgo de susceptibilidad/resistencia a esta enfermedad infecciosa, es necesario continuar con el rastreo de marcadores genéticos o combinaciones haplotípicas que contribuyan a conocer en detalle los mecanismos moleculares involucrados en la patogenia de la Anemia Infecciosa Equina. 1. Brown,J.J.; Ollier,W.E.; Thomson,W.; Matthews,J.B.; Carter,S.D.; Binns,M.; Pinchbeck,G.; Clegg,P.D. TNF-alpha SNP haplotype frequencies in equidae. Tissue Antigens, 67(5): 377-382, 2006. 2. Hořín,P.; Smola,J.; Matia?ovic,J.; Vyskočil,M.; Lukeszova,L.; Tomanová,K.; & Jahn,P. Polymorphisms in equine immune response genes and their associations with infections. Mammalian genome, 15(10): 843-850, 2004.