Efecto del manganeso sobre la concentración de glutatión en ovocitos y células del cúmulus

ANCHORDOQUY, JP, ANCHORDOQUY JM, SIRINI MA, ROSA DE, PICCO SJ, FURNUS C

Córdoba

Congreso; 35° Congreso Argentino de Producción Animal; 2012

Asociación Argentina de Producción Animal

En el bovino, la carencia de manganeso (Mn) se caracteriza por provocar fallas reproductivas. La concentración intracelular de glutatión (GSH) en el ovocito maduro, es un indicador de la capacidad de desarrollo embrionario posterior. Estudios recientes en roedores han demostrado un incremento en el contenido intracelular de GSH con la suplementación oral de Mn. El objetivo del presente trabajo fue evaluar el efecto del Mn sobre el contenido total de GSH en ovocitos y células del cúmulus (CC) de bovino y su capacidad de desarrollo hasta el estadio de blastocisto. Para ello, se obtuvieron COC de ovarios de frigorífico (n=7 repeticiones) y en cada día se recogieron 200 COC que se dividieron en 4 grupos de 50 COC (unidad experimental) por tratamiento. El medio de MIV fue TCM 199 suplementado con 5% de SFB, FSH y LH. Los tratamientos consistieron en el agregado de Mn al medio de MIV de modo de alcanzar las concentraciones indicativas de carencia severa (CS), moderada (CM) o normalidad (N) en el plasma (2,3, 4,3 y 6,3 ng/ml respectivamente), quedando un tratamiento control (C) sin suplementar (0,3 ng/ml de Mn). Se utilizó la técnica de Producción in vitro de embriones bovinos: maduración in vitro (MIV), fertilización in vitro (FIV) y cultivo in vitro (CIV). La determinación de GSH se realizó mediante el empleo de un método enzimático colorimétrico a partir de una curva estándar de GSH. Para el desarrollo, se evaluaron el porcentaje de embriones de 2 células (Clivaje) y el porcentaje de blastocistos a Día 7. Se utilizó un diseño experimental en bloque completamente aleatorio. El análisis estadístico para GSH se realizó con el procedimiento MIXED de SAS 9.0, mientras que los resultados de desarrollo se analizaron mediante una regresión logística con el procedimiento GENMOD de SAS 9.0. Los resultados obtenidos muestran un aumento en la concentración de GSH (p < 0,01) en ovocitos y CC con el agregado de Mn al medio de MIV (Tabla 1). Un comportamiento similar se observa en la tasa de blastocistos (p < 0,05, Tabla 2). En base a estos resultados podemos concluir que el agregado de Mn al medio de maduración aumenta la concentración intracelular de GSH en ovocitos y CC y la capacidad de estos ovocitos para desarrollar hasta el estadio de blastocisto. Por lo tanto, el aumento de GSH podría ser uno de los mecanismos por el cual el Mn mejora el desarrollo embrionario posterior in vitro.   Tabla 1: Contenido intracelular de GSH total en ovocitos bovinos y células del cúmulus (CC) luego de la MIV con distintas concentraciones de manganeso.   Tratamientos       C CS CM N EEM p < CC 3,52a 4,32b 5,45c 5,2c 0,28 0,01 Ovocito 0,29a 0,38b 0,5c 0,5c 0,04 0,01   Tabla 2: Capacidad de desarrollo de ovocitos de bovino madurados in vitro con distintas concentraciones de manganeso   Tratamientos     C CS CM N p < Clivaje 72,38 a 74,90 a 81,14 a 75,57 a 0,05 Tasa de Blastocisto 20,76 a 29,54 b 38,25 c 39,16 c 0,05