IGEVET   21075
INSTITUTO DE GENETICA VETERINARIA "ING. FERNANDO NOEL DULOUT"
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Evaluación de tres técnicas de PCR para detectar Salmonella spp. a partir de carne picada.
Autor/es:
ALIVERTI V.; LIRON J.P.; BRUSA V.; ALIVERTI F,; BROCARDO S.; LEOTTA G.A.
Lugar:
Ciudad Autónoma de Buenos Aires
Reunión:
Congreso; I CONGRESO INTERNACIONAL DE ZOONOSIS Y ENFERMEDADES EMERGENTES Y VII CONGRESO ARGENTINO DE ZOONOSIS.; 2011
Institución organizadora:
Asociación Argentina de Zoonosis
Resumen:
La salmonelosis es una de las enfermedades zoonóticas más  frecuente en el mundo. Los animales son el principal reservorio de Salmonella spp. y el consumo de  alimentos contaminados es una de las vías de transmisión al hombre. En el Código Alimentario Argentino (CAA)  se establece como parámetro microbiológico obligatorio para carne picada fresca  la ausencia de Salmonella spp.  y para su análisis se recomienda el Capítulo 5 Salmonella-BAM.  Para realizar esta metodología se requiere demasiado tiempo por  lo cual es necesario contar  con una técnica de tamizaje a partir del caldo de pre-enriquecimiento. El  objetivo de este trabajo fue evaluar tres técnicas de PCR para el tamizaje de Salmonella spp. a partir de carne picada.  Se diseñó una técnica de PCR en tiempo real para la detección de Salmonella spp. utilizando SYBR Green.  Se determinó la inclusividad y exclusividad de la técnica con 25 cepas de Salmonella y 30 cepas no-Salmonella. La técnica de PCR-TR  diseñada, una PCR convencional y una técnica de PCR-TR comercial (Foodproof®Salmonella Detection Kit - 5´  nuclease, Merck) fueron evaluadas con 58 muestras de carne picada obtenidas a nivel  de boca de expendio minorista. Las muestras fueron procesadas según la  metodología recomendada en el CAA. A partir del caldo de pre-enriquecimiento se  realizó la extracción de ADN mediante ebullición en buffer tritón y el mismo  extracto fue utilizado para realizar las tres PCR. Los resultados obtenidos con  las técnicas de PCR fueron contrastados con los resultados obtenidos en el  aislamiento. Con la técnica de PCR invA  se obtuvo 81,8% (IC 59,0-100) de inclusividad, 93,6% (IC 86,6-100) de  exclusividad, 75,0% (50,5-99,5) de valor predictivo positivo y 95,6% (IC  89,7-100) de valor predictivo negativo. Con la técnica de PCR-TR diseñada se  obtuvo 72,7% (IC 46,4-99,0) de inclusividad, 95,7% (IC 89,9-100) de  exclusividad, 80,0% (55,2-100) de valor predictivo positivo y 93,7% (IC  86,9-100) de valor predictivo negativo. Con la técnica de PCR-TR comercial se  obtuvo un 100% de inclusividad, exclusividad, valor predictivo positivo y valor  predictivo negativo. Los resultados obtenidos con la PCR comercial coincidieron con  el aislamiento, sin embargo las PCR artesanales no cumplieron con el desempeño  esperado. Los resultados falsos positivos pueden deberse a la amplificación de  secuencias inespecíficas y entre las causas de resultados falsos negativos se  encuentra el diseño de los oligonucleótidos utilizados. Estos inconvenientes pueden  resolverse rediseñando los oligonucleótidos en base a las secuencias de los  aislamientos circulantes en Argentina, como así también mediante el diseño y  utilización de sondas de hidrólisis y controles internos de amplificación.