INVESTIGADORES
ALVAREZ Hector Manuel
congresos y reuniones científicas
Título:
Genes de la síntesis de triacilglicéridos en la bacteria oleaginosa Rhodococcus opacus PD630
Autor/es:
ALVAREZ AF,; KALSCHEUER R,; STEINBÜCHEL A,; ALVAREZ, H. M.
Lugar:
Bahía Blanca
Reunión:
Congreso; III Jornadas de Bioquímica y Biología Molecular de Lípidos y Lipoproteínas.; 2005
Resumen:
Rhodococcus opacus PD630 acumula grandes cantidades triacilglicéridos y en menor medida ceras. Esta característica está restringida a unos pocos géneros bacterianos, principalmente pertenecientes al grupo de los actinomycetes, tales como Mycobacterium, Nocardia, Streptomyces, Rhodococcus, además de la bacteria Gram-negativo Acinetobacter calcoaceticus. En R. opacus PD630 el contenido total de ácidos grasos alcanza el 76 % del peso seco celular con gluconato como fuente de carbono, por lo que este microorganismo es considerado un modelo de bacteria oleaginosa. Con el uso de primers degenerados basados en secuencias consenso de diferentes cera-sintasa/diacilgicerol aciltransferasas (ws/dgat) pertenecientes a Acinetobacter calcoaceticus ADP1 y Mycobacterium smegmatis mc2155, se identificó el primer gen relacionado con la síntesis de triacilglicéridos en R. opacus PD630 (gen PD-tag1). La secuencia de aminoácidos del gen mostró una homología de entre 20 y 30 % con la proteína WS/DGAT de A. calcoaceticus y proteínas relacionadas de distintas especies de Mycobacterium. Se encontraron además los motivos conservados comunes a proteínas relacionadas, incluyendo el posible sitio activo HHXLXDGXS. Cuando se comparó la secuencia con el genoma de Rhodococcus sp. RHA1, cuyas anotaciones estan disponibles en Internet, se encontraron 15 secuencias homólogas, siendo una de ellas 89 % idéntica a la del gen identificado en la cepa PD630. Las secuencias obtenidas de la cepa RHA1 se usaron para la amplificacion directa mediante PCR de otros posibles genes ws/dgat de R. opacus PD630. De esta manera se lograron identificar y clonar hasta el momento 4 nuevos genes que codificarían para diacilglicerol-aciltransferasas. Los genes dgat identificados fueron clonados y expresados en E. coli, resultando la actividad tanto de diacilglicerol-aciltransferasa como de cera sintasa muy baja, en comparación con la actividad enzimática en la cepa PD630. Actualmente, se está construyendo una mutante knock-out en el gen PD-tag1 de la cepa PD630, para posteriores estudios fisiológicos.