Producción y regeneración de protoplastos de Agrocybe aegerita: posibles aplicaciones al mejoramiento genético

UHART, M.; ALBERTÓ, E.

Chascomús, Buenos Aires, Argentina

Jornada; Primeras Jornadas Argentinas Sobre Biología y Cultivo de Hongos Comestibles y Medicinales; 2005

Instituto de Investigaciones Biotecnológicas sede Chascomús

PRODUCCIÓN Y REGENERACIÓN DE PROTOPLASTOS DE AGROCYBE AEGERITA: POSIBLES APLICACIONES AL MEJORAMIENTO GENÉTICO.   M. Uhart y E. Albertó   Laboratorio de Micología y Cultivo de Hongos Comestibles. IIB-INTECH (UNSAM-CONICET). CC 164. B7130IWA Chascomús, Argentina. maruhart@intech.gov.ar   Agrocybe aegerita (Brig.) Sing. es un hongo de alto valor culinario producido en Europa y Oriente, y aún no es cultivado a escala comercial en Argentina. El mejoramiento genético permitiría obtener variedades que se adapten mejor a los sustratos disponibles en nuestro país. La imposibilidad de obtener aislamientos monocariontes a partir de esporas de cepas argentinas conduce a la necesidad de utilizar un método alternativo para lograr dicho mejoramiento. La obtención y fusión de protoplastos es una alternativa válida para tal fin (1). Nuestro objetivo fue lograr y optimizar la producción, purificación y regeneración de protoplastos de A. aegerita. La producción optimizada de protoplastos resultó al usarse micelio de 5 días de crecimiento en medio líquido RC sin agitación. La digestión enzimática fue realizada con 20 mg/ml de celulasa Onozuka y 20 mg/ml de Yeast Lytic Enzyme en 0,75 ml. de tampón succinato pH 4,6, a 30 °C, con agitación (60 rpm), por una noche, en frascos de 2,5 cm de diámetro. La purificación fue óptima cuando la suspensión de protoplastos se centrifugó a 300 g sobre sacarosa 1 M (15 min., 4 °C). Luego de seis días se observaron las primeras colonias regeneradas en medio APG con sacarosa 0,5 M.     1. Kim BK, Kang JH, Jin M, Kim HW, Shim MJ, Choi EC. 2000. Life Sci. 66(14):1359-67.