INVESTIGADORES
PODEROSO Juan Jose
congresos y reuniones científicas
Título:
El estado redox contribuye al destino celular por la oxidación de cisteínas específicas de MAPKs en mitocondria.
Autor/es:
ANTICO-ARCIUCH, VG, GALLI, S, CONVERSO DP, PODEROSO C, CARRERAS, MC, PODEROSO, JJ.
Lugar:
Mar del Plata, Argentina
Reunión:
Congreso; LII Reunión Científica Sociedad Argentina de Investigación Clínica.; 2007
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Investigación Clínica.
Resumen:
La modulación de la concentración de H2O2 mitocondrial determina el destino celular, favoreciendo la proliferación, el arresto o la apoptosis. El alto contenido de P-ERK está asociado a proliferación a baja [H2O2] mientras que el arresto requiere alta [H2O2] con activación de p38 y JNK. Nos propusimos determinar el mecanismo por el cual H2O2 activa MAPKs de manera específica y diferencial en la línea celular tumoral P07. Para estudiar la interacción entre MAPKs y sus MAPKKs, las fracciones citosólica y mitocondrial se incubaron con ERK2, p38 o JNK2-GST fusionadas a agarosa, previamente oxidadas con H2O2. Los complejos se precipitaron y corrieron en un SDS-PAGE. La modulación de la localización subcelular de ERK2 por H2O2 se analizó transfectando células con las mutantes H230R, Y261N, C38A, C214A y C214E por western blot. La identificación de las cisteínas oxidables se llevó a cabo por espectrometría de masa (MS). La oxidación de ERK2-GST a baja H2O2 (condición proliferante) resultó en una marcada asociación a MEK y la interacción de p38 y JNK con sus MAPKKs fue favorecida por incubación a alta H2O2 (asociado a arresto celular). En células transfectadas con ERK2 H230R o Y261N la quinasa quedó retenida en mitocondria, disminuyendo su importe al núcleo. Por MS, a 0.1 μM H2O2 los tioles de C38 y 14 de ERK2 fueron oxidados a -SO2H y -SO3H. En JNK2, a 1 μM H2O2 los tioles de C41, 137, 177 y 222 fueron convertidos a -SO2H y C116 a –SO3H. A 20 μM H2O2, la C162 de p38 fue oxidada a -SO3H. Las transfecciones mostraron que H2O2 no afectó el binding mitocondrial de MEK a ERK2 C214A. En ausencia de H2O2, se reestableció la asociación ERK2-MEK al reemplazar C por E, demostrando la importancia de las cargas negativas en estas interacciones. Estos resultados sugieren que la oxidación de MAPKs en mitocondria determina la interacción diferencial con sus MAPKKs, causando un aumento de su fosforilación tras la oxidación y la activación selectiva de caminos de señalización celular.