INVESTIGADORES
PODEROSO Juan Jose
congresos y reuniones científicas
Título:
Estudio de la traslocación de iNOS a la mitocondria en modelos de transcripción in vitro y en cultivos celulares
Autor/es:
FRANCO MC; ANTICO ARCIUCH VG; MOLINAS F; SASSONE A; PODEROSO JJ; CARRERAS MC
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; LI Reunión Científica Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2006
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Investigación Clínica
Resumen:
En la endotoxemia, el óxido nítrico (NO) aumenta la producción mitocondrial de especies reactivas del oxígeno y la formación de peroxinitrito que resulta en un deterioro severo de la función mitocondrial y la consiguiente falla orgánica. La administración de 10 mg LPS/kg a ratas Wistar machos estimula la expresión de NO sintasa inducible (iNOS) en el hígado a partir de las 2 hs post tratamiento, con un pico a las 6 hs. El aumento citosólico es seguido de la aparición de iNOS en la mitocondria, resistente al tratamiento con proteinasa K (PK). Con el objeto de estudiar la traslocación de iNOS a mitocondria realizamos ensayos in vitro con sistemas de transcripción-traducción (STT) TnTQuick y transfectamos células HEK293, que no expresan ninguna isoforma de NOS, utilizando el vector piNOSL8 que presenta un promotor T7 y otro de citomegalovirus. En los ensayos in vitro, las mitocondrias (80 ug) de ratas control (C) o 4h post-LPS fueron incubadas con la enzima sintetizada por el STT,  con o sin fracción citosólica y posteriormente una alícuota fue tratada con PK para eliminar las proteínas asociadas a la membrana externa mitocondrial. iNOS se encontró en mitocondrias tanto de ratas C como de ratas tratadas con LPS pero únicamente al coincubarlas con citosol de ratas 4h-post LPS. El tratamiento con PK removió totalmente la iNOS en mitocondrias C, mientras que en las mitocondrias post LPS la proteína fue parcialmente resistente al tratamiento. En células HEK 293 transfectadas 24 hs con piNOSL8 se observó la expresión de iNOS en citosol y la entrada de la proteína a mitocondria, lo que le confirió resistencia al tratamiento con PK. Conclusiones: a) la entrada post-traduccional de iNOS a la mitocondria in vitro requiere factores del huésped o bacterianos presentes tanto en la mitocondria como en el citosol de la rata tratada con LPS; b) el importe mitocondrial de iNOS in vivo no dependería de estímulos bacterianos y podría ocurrir por mecanismos cotraduccionales.