INVESTIGADORES
PODEROSO Juan Jose
congresos y reuniones científicas
Título:
El estado redox celular regula la fosforilación de Akt en thr308 y su traslocación a mitocondria.
Autor/es:
ANTICO ARCIUCH, VG; FRANCO MC; SASSONE A; CARRERAS MC; PODEROSO JJ
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; LI Reunión Científica Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2006
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Investigación Clínica
Resumen:
Akt es una serina/treonina proteína quinasa activada por varios estímulos como factores de crecimiento, citoquinas y estrés, que regula la supervivencia celular. Para su completa activación Akt1 debe ser fosforilada secuencialmente en ser473 y thr308. En trabajos anteriores demostramos que la exposición de las células NIH/3T3 a 50 µM H2O2 provoca un aumento en el índice de proliferación mientras que 250 µM H2O2 induce la entrada de las células en apoptosis a través de la activación y tráfico diferencial de Akt1. El objetivo de este trabajo fue analizar la traslocación y posterior activación de Akt1 en mitocondria por H2O2 y la conexión con la inducción de apoptosis en la línea celular NIH/3T3. El índice de apoptosis fue evaluado por citometría de flujo con ioduro de propidio y anexina V. La distribución subcelular de P-Akt (núcleo, mitocondria y citosol) se analizó mediante transfección transiente con pcDNA3-Akt1 wt y dominante negativo (dn) y western blot anti HA-tag. La activación de Akt1 por fosforilación en thr308 y la liberación de citocromo c fueron analizadas por western blot. El tratamiento de las células con 250 µM H2O2 causó un 53% de apoptosis evidenciada por tinción con anexina V, aparición de un pico hipodiploide en la citometría de flujo y liberación de citocromo c al citosol. Por otra parte, diferencias en el estado redox celular provocaron una activación diferencial de Akt1: a 50 µM H2O2 la activación de Akt1 y su translocación al núcleo fueron rápidas y persistentes mientras que a 250 µM H2O2 la quinasa no translocó al núcleo. 50 µM H2O2 provocó la segunda fosforilación de Akt1 en thr308 en mitocondria, efecto que no ocurrió a 250 µM. Estos resultados sugieren que H2O2 provoca la activación selectiva y tráfico diferencial de Akt1 regulando la progresión del ciclo celular. De esta forma, la retención mitocondrial de Akt1 podría restringir los efectos nucleares proliferativos favoreciendo la activación de la apoptosis.