INVESTIGADORES
PODEROSO Juan Jose
congresos y reuniones científicas
Título:
Insulina induce la traslocación de p-Akt2 y la activación de nnos en mitocondrias de músculo esquelético: el óxido nítrico dirige el metabolismo de la glucosa hacia la oxidación o hacia la síntesis de glucógeno
Autor/es:
FINOCCHIETTO P; BARREIRO F; HOLOD S; PERALTA J; FRANCO MC; CONVERSO D; CARRERAS MC; PODEROSO JJ
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; LI Reunión Científica Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2006
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Investigación Clínica
Resumen:
Insulina-PI3-K activa Akt. La Oxido Nítrico Sintasa neuronal (nNOS) traslocada a la mitocondria (mtNOS) presenta un dominio fosforilable por Akt en serina 1412. Objetivo: analizar efectos de insulina y Akt sobre la mtNOS y el metabolismo de la glucosa en músculo esquelético de rata. Con este propósito ratas Wistar (200-250g) fueron inoculadas con 0.1U/Kg insulina glargina o ClNa 0.9% s.c y se extrajeron los músculos extensoris y soleus a las 3, 12 y 24 h. Las mitocondrias fueron aisladas por centrifugación diferencial y la actividad de mtNOS se determinó por H3-L-Arg. La expresión y/o actividad mitocondriales de nNOS, p-Akt, y GSK-3 α/ß se analizaron por Western Blot y por citometría de flujo. La purificación de nNOS se realizó con Tag His6 en N- terminal sobreexpresada en Escherichia Coli y purificada con Kit HisLink 96 Protein Purification System. La fosforilación de mtNOS se estudió en mitocondrias incubadas con insulina, Akt-2 y 32P-ATPγ. Post electroporación e inoculación con siRNA nNOS o Akt2 in vivo, se extrajo el músculo gastrocnemius, se midió la entrada de glucosa con deoxy-D-glucose,2 [1,23H(N)], síntesis de glucógeno con glucose, D-[14C(U)] y utilización de glucosa con glucose D-[5-3H(N) ]. Resultados: a) AKT fosforilado trasloca a la mitocondria, b) Insulina-pAkt incrementó 5 veces la actividad de mtNOS por fosforilación, c) siARN nNOS disminuyó un tercio la incorporación de C14-glucose a glucógeno incrementando 3 veces la oxidación a C14O2 y 3H2O, d) siRNA Akt2 redujo la actividad de mtNOS y la síntesis de glucógeno un 70%. Conclusión: insulina vía Akt actúa sobre el metabolismo de la glucosa por su fosforilación y traslocación a la mitocondria. e) p-Akt fosforila mtNOS aumentando su actividad, controlando la transferencia de electrones y promoviendo las vías biosintéticas.