INVESTIGADORES
PODEROSO Juan Jose
congresos y reuniones científicas
Título:
Traslocacion y activación de nNOS en mitocondrias
Autor/es:
ELGUERO E; PODEROSO JJ, CARRERAS MC
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; LV Reunion Cientifica Sociedad Argentina de Investigación Clinica; 2010
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Investigación Clínica
Resumen:
En 1998 descubrimos la presencia de nNOS en mitocondrias; mtNOS exhibe cambios postraduccionales como fosforilación en Ser1412 y acilación en NH2 terminal. Observamos que mtNOS depende de la actividad transcripcional nuclear y es regulada por hormonas (T3, insulina) contribuyendo al desarrollo de enfermedad metabólica. La presencia de nNOS en mitocondrias depende de los mecanismos de importe desde el citosol. El objetivo de este trabajo es evaluar la contribución de la quinasa Akt2 y de la proteasa dependiente de Ca+2, calpaína 1, en el proceso de entrada de nNOS a mitocondria. Por microscopía confocal, se observó co-localización de nNOS en mitocondrias en el importe por transfección transiente de cDNA de nNOS a células HEK293 carentes de esta isoforma y en células HEK-nNOS (transfectadas estables con la enzima) co-transfectadas con un vector de YFP unido a una secuencia de localización mitocondrial. Experimentos in vivo y con transcripción-traducción in vitro (TTI) y anticuerpos específicos mostraron disminución del PM aparente de 157 a 130 kDa consecuente a la pérdida del dominio PDZ. En células HEK pre-tratadas con insulina, Akt estimulado vía PI3K aumentó la traslocación y el nivel mitocondrial de PnNOS-Ser1412 (0,52 ± 0,04 control vs. 1,17 ± 0,31 insulina) sin observar efecto significativo de Akt recombinante en TTI. En cambio, la activación de calpaína mitocondrial (por incubación con ionóforo de Ca2+) condujo al aumento de nNOS en la fracción mitocondrial in vivo (0,75 ± 0,08 control vs. 1,67 ± 0,11 ionóforo) y al clivaje de nNOS in vitro (rcalpaína) por corte en aa. 129-131, liberando el dominio PDZ (aa. 17-99). Se sabe que calpaína interacciona con Akt, nNOS y Hsp90 en citosol y por lo tanto proponemos una secuencia de estimulación de la translocación de nNOS por activación de calpaína vía Ca2+, interacción calpaína-nNOS, clivaje de dominio PDZ Nterminal, importe de nNOS, fosforilación intramitocondrial por P-Akt y activación de mtNOS.