INVESTIGADORES
PODEROSO Juan Jose
congresos y reuniones científicas
Título:
La isoforma mitocondrial de NOS neuronal (nNOS) carece del dominio PDZ de interacción proteína-proteína en el hígado
Autor/es:
MARÍA FLORENCIA MOLINAS, MARÍA CLARA FRANCO, ANALÍA GONZALEZ, JUAN JOSÉ PODEROSO Y MARÍA CECILIA CARRERAS
Lugar:
Buenos Aires, Mar del Plata
Reunión:
Congreso; Reunión Anual Saic – SAFIS 2008; 2008
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Investigación Clínica
Resumen:
Durante el desarrollo de la condición hipotiroidea en ratas Wistar tratadas con 0.02% metimazol en el agua de bebida, hay un pico en la expresión de nNOS y en su translocación a las mitocondrias de hígado a los 14 días de tratamiento. En este tejido, el peso molecular (PM) aparente de nNOS en la mitocondria es 130 kDa, en contraste con la isoforma citosólica, de 160 kDa. A continuación, estudiamos la localización intramitocondrial de nNOS en hígado de ratas tratadas 14 días con metimazol, mediante fraccionamiento submitocondrial seguido de Western blot, utilizando un anticuerpo que reconoce el extremo C-ter de nNOS. La enzima se encontró en espacio intermembrana y matriz y, en menor medida, en membrana externa. Un anticuerpo policlonal que reconoce el extremo N-ter de nNOS falló en detectar la proteína en las fracciones submitocondriales pero sí reconoció nNOS de citosoles de cerebro e hígado y nNOS sintetizada en un sistema in Vitro. Este mismo anticuerpo tampoco detectó una forma truncada de nNOS, de 130 kDa de PM aparente, que carece del dominio PDZ (aminoácidos 1 a 100). Esta proteína, sintetizada in Vitro, sí fue reconocida por el anticuerpo anti-C-ter. Un anticuerpo que reconoce los aminoácidos 144 a 262 de nNOS detectó la enzima en todos los casos señalados anteriormente. Para corroborar estos resultados, aislamos hepatocitos de ratas Wistar de 10 días de edad, donde nNOS tiene un PM aparente de 130 kDa tanto en citosol como en mitocondria. Mientras que los anticuerpos anti-C-ter y anti-144 a 262 reconocieron la banda de nNOS en ambas fracciones, el anticuerpo anti-N-ter no detectó la enzima en ninguno de los dos casos pero sí reconoció nNOS de citosol de cerebro (control positivo). En el hígado, la translocación de nNOS a la mitocondria requiere la pérdida de su dominio PDZ, lo que podría implicar un nuevo mecanismo de translocación a mitocondria por proteólisis parcial de la proteína.