La Hipoxia Prenatal Produce Una Inhibición Del Complejo I Dependiente de NO En Mitocondrias Del SNC

GIUSTI S; CONVERSO D; PODEROSO JJ; FISZER DE PLAZAS S

Huerta Grande, Córdoba

Taller; VIII Taller Argentino de Neurociencias; 2006

Numerosas vías moleculares interconectadas conducen al daño cerebral luego de un evento de hipoxia/reoxigenación. Si bien aun no están completamente elucidadas existen evidencias que involucran a la disfunción mitocondrial y a la sobreproducción de especies reactivas como el anión superóxido (O2-•) y el óxido nítrico (NO•) en la injuria hipóxica. El objetivo del presente trabajo ha sido determinar la existencia de cambios tempranos en la expresión de la NOS mitocondrial (mtNOS) y en la nitración de proteínas mitocondriales y evaluar su relación con la modulación del complejo respiratorio NADH-ubiquinona oxidoreductasa (Complejo I). El modelo experimental es el lóbulo óptico de embriones de pollo en el día embrionario 12 sometidos a una hipoxia (H) aguda prenatal (8% [O2], 60 min.) seguida de distintos tiempos de reoxigenación (ROX): 1hs, 2hs, 3hs, 4hs, 24hs y 48hs, A tal fin se utilizaron fracciones mitocondriales aisladas en los diferentes tiempos mencionados. La expresión de mtNOS y la abundancia de proteinas nitradas se determinó mediante western blot, y la actividad del Complejo I se midió monitoreando la oxidación de NADH a 340nm. Para analizar la relación entre la producción de NO y la actividad del Complejo I, se administró L-NAME, un inhibidor de la NOS, 20 minutos antes de la hipoxia. Los resultados obtenidos muestran un incremento significativo en la expresión de mtNOS al finalizar la hipoxia (p<0.05) y en las primeras dos horas de ROX. En tiempos coincidentes, se observó una elevación significativa (p<0.05) de la nitración proteica. Además, se observó una disminución del 50% en la actividad máxima del Complejo I al cabo de la hipoxia y durante las 4 hs siguientes de ROX, recuperándose totalmente al cabo de las 48hs. La administración de L-NAME revirtió la inhibición del Complejo I, siendo este efecto dependiente de la dosis. En conclusión, los eventos de H/ROX producen en las mitocondrias del SNC en desarrollo una sobreexpresión de mtNOS, provocando stress nitrosativo y la inhibición del Complejo I, probablemente debida a la nitración de sus subunidades proteicas.