Caracterización genética por SSCP de hongos micorrícicos arbusculares nativos de la Puna argentina

CRESPO E. M.; HERNÁNDEZ GUIJARRO, K; LUGO M. A.; COVACEVICH F.; M.S. RIVERO MEGA

Río IV

Congreso; XXV Congreso Argentino de la Ciencias del Suelo; 2016

Asociación Argentina de la Ciencia del Suelo-UNRIV

Los hongos-micorrícicos-arbusculares (HMA) establecen las simbiosis mutualistas con raíces de las plantas más frecuentes y cosmopolitas. Sin embargo, aún existen escasos estudios sobre la estructura genética de las comunidades de HMA nativas de ambientes áridos y semi-áridos de la Argentina. Debido a que los HMA son biótrofos obligados y se reproducen asexualmente, su diversidad fue tradicionalmente estudiada analizando la morfo-anatomía y ontogenia de sus esporas. La variación en los caracteres taxonómicos de las esporas recolectadas directamente del campo y las condiciones de crecimiento pueden dificultar las determinaciones, esto fue parcialmente sorteado por la multiplicación de HMA en condiciones controladas mediante `Cultivos Trampa`. Además, los avances en técnicas moleculares contribuyeron con la taxonomía de los HMA; particularmente, la técnica de Single-Stranded-Conformation-Polymorphism (SSCP) que permite determinar diferencias en la secuencia genética de nucleótidos entre cadenas. El objetivo de este trabajo fue analizar la estructura genética de HMA nativos de la Puna argentina a través de estudios de taxonomía clásica combinados con la estrategia PCR-SSCP. En 3 sitios a 3370 m. sobre nivel del mar se recolectaron muestras de suelo compuestas (5 submuestras a 12-20 cm de profundidad) en la Puna, Provincia de Jujuy, camino a Iturbe. Con el objetivo de testear la representatividad del área y método de estudio, un sitio fue dividido en tres bloques y las muestras recolectadas y procesadas como independientes. Los HMA se multiplicaron 80 días en cultivos trampa utilizando sorgo y melilotus como plantas hospedantes; las esporas se extrajeron del sustrato por tamizado en húmedo y centrifugación con sacarosa y se identificaron por taxonomía clásica. Paralelamente se realizó la extracción de ADN del sustrato de los cultivos trampa y se efectuaron dos reacciones de PCR sucesivas, amplificándose en la segunda reacción parte de la región 28S rADN utilizando cebadores específicos para HMA. Los productos de la segunda reacción fueron corridos en electroforesis vertical en un gel no desnaturalizante de MDE. El patrón de bandas del gel SSCP evidenció 25-33 bandas en los sitios estudiados y las muestras recolectadas como réplicas mostraron similar patrón de bandas. Para confirmar la identidad de los HMA, una banda de cada muestra del gel fue cortada, reamplificada y secuenciada. El análisis de taxones por Maximum Parsimonia agrupó, tal como se esperaba, las bandas secuenciadas junto con representantes del género Funneliformis, permitiendo confirmar la especificidad de los cebadores utilizados. Además, la localización de las bandas se mantuvo separada de los otros géneros de HMA (Acaulospora. Gigaspora, Ambispora y Scutellospora). Los resultados fueron mayoritariamente consistentes con las morfo-especies determinadas, evidenciando la importancia de la combinación de técnicas clásicas y moleculares para estudios de diversidad de HMA.