CONICET | Buscador de Institutos y Recursos Humanos

Los endocannabinoides (eCBs) son sustancias endógenas altamente apolares, de naturaleza lipídica derivadas del ácido araquidónico. Estos compuestos, particularmente la anandamida, desempeñan un papel importante en una amplia gama de procesos fisiológicos. La evidencia de alteración (aumento o disminución) de los niveles de eCBs en una variedad de patologías ha alimentado el interés en la cuantificación precisa de estos lípidos en diversos tejidos y fluidos corporales tales como el plasma. Frente a esta situación, resulta esencial la utilización de metodologías robustas y sensibles para analizar estos mediadores lipídicos. Los recientes avances en espectrometría de masas han permitido a los investigadores proponer varias metodologías para cuantificar eCBs en diversos sistemas biológicos. Aunque los sistemas de espectrometría de masas presentan una ventaja significativa sobre la cromatografía líquida de alto rendimiento con detección de matriz de diodos (HPLC-DAD), relacionada con su alta sensibilidad, los métodos de HPLC-DAD son más fáciles, más económicos y más accesibles. Considerando lo expuesto, es que se propuso desarrollar una nueva metodología analítica, más sencilla y asequible que las usadas habitualmente, que permita la cuantificación de anandamida en muestras de plasma sanguíneo utilizando la técnica de HPLC-DAD, las condiciones operacionales fueron optimizadas, se trabajó con una Columna de fase reversa ODS 25 cm Marca Spherisorb (Waters), se trabajó con gradiente isocrático empleando como solventes acetonitrilo: agua acidificada (Con qué?) (80:20) y flujo de 1 mL/min. La longitud de onda seleccionada fue de 210 nm. Con estas condiciones se obtuvo un tiempo de retención del estándar de anandamida fue de 7,73 ±0.07 min. Se realizó una curva de calibrado obteniéndose un rango dinámico lineal hasta la concentración de 3000 ppm (r2 0,9999). Se evaluó el efecto de la matriz en la cuantificación y los resultados obtenidos no evidenciando diferencias significativas en los tratamientos considerados. Con las condiciones mencionadas pudo hallarse LOQ y LOD de .Las muestras de sangre refrigerada, fueron centrifugadas a rpm con la finalidad de separar el plasma de . Para la extracción del analito de interés, se procedió mediante optimización univariada y los parámetros considerados fueron: tipo de solvente, volumen de solvente, tiempo de ultrasonido, temperatura. Como resultado se obtuvo que la combinación óptima de variables fue: la adición de 800 microlitros de acetonitrilo a 200 microlitros de plasma y 5 min de US, obteniéndose la mejor extracción, seguida de centrifugación a 14000 rpm durante 5 min y posterior filtración (0,22 Um), previa inyección en el cromatógrafo. Por ultimo se procedió al análisis en muestras reales y se pudo concluir que la metodología desarrollada reúne las condiciones analíticas de calidad para su empleo en múltiples aplicaciones.