Expresión de TLR4 en Polimorfonucleares (PMN) y monocitos circulantes en Síndrome

SILVIA MELECHUK; WALTER MANUCHA; ADRIANA GONZALEZ; ROBERTO VALLÉS; PATRICIA G. VALLES

Centro de Docencia y Capacitación Pediátrica "Dr. Carlos A Gianantonio" Salguero 1244 Ciudad de Buenos Aires

Congreso; 4º Congreso Argentino de Nefrología Pediátrica; 2009

Sociedad Argentina de Pediatría

La reacción inflamatoria, inducida por los componentes de Escherichia coli enterohemorrágica (EHEC); lipopolisacáridos y toxina shiga, contribuyen decisivamente en la etiopatogenia de SUH. Ambos factores estimulantes están involucrados en la respuesta inmune innata.Toll-like receptor 4, proteína que reconoce al lipopolisacárido bacteriano y otros patrones moleculares asociados a patógenos (PAPMs) interviene en la respuesta celular inmune innata inicial. Los eventos moleculares intracelulares iniciados por la interacción entre TLRs y sus PAPMs específicos, desencadenan respuesta inflamatoria sistémica. La activación de la señal de transducción de los TLR induce la expresión de genes de citoquinas inflamatorias y quimioquinas, Objetivo: Estudio de la expresión de  TLR4  en PMN y monocitos  circulantes y de la respuesta inducida por su señalización mediante determinación de los niveles de TNF-α , IL-8, IL 10,e IL 12  en pacientes  SHU D+ Población; Se estudiaron: Pacientes SUH 2.5 ± 1años, n=11 dentro de las 24hs y 72hs de certeza diagnóstica, a los 10 y 30 dias de evolución, pacientes con diarrea enterohemorrágica; 2.8±2 años, n=7 y controles 4.5±2 años, n=7. Material y Métodos: Aislamiento y tipificación de STEC, expresión de TLR4 en polimorfonucleares (PMN) y monocitos por citometría de Flujo, mRNA de TLR4 por RT-PCR en PMN. Determinación sérica de TNF-α, IL-8, IL 10, IL 12 por ELISA. Resultados: Incremento de mRNA de TLR4 fue demostrado en PMN de pacientes SUH dentro de las 24 hs de diagnóstico respecto a controles;  0.541±0.03  vs  0.314±0.01, p <0.01, sin diferencias en pacientes SUH 10 y 30 días post evolución y diarrea enterohemorrágica vs controles: 0.434±0.02, 0.424±0.01 y 0.460±0.25 vs 320±0.01, respectivamente. Los PNM de pacientes SUH 24 hs incubados con  anti-TLR4 mostraron incremento en el porcentaje de células positivas respecto a controles 36.5±5.6% vs 7.6±2.7% sin diferencias en pacientes SUH 72hs, 10 y 30 días y pacientes con diarrea enterohemorrágica respecto a niños sanos. La expresión de TLR4 en monocitos no mostró diferencias entre grupos. En SUH 24hs de evolución, se demostró elevación en niveles de IL-8 y TNFα, con valores similares a controles de IL12 e IL10. Conclusión: El incremento temprano en la expresión de TLR4 en PMN podría asociarse a la intensificación de la respuesta proinflamatoria inmune innata en SUH. Futuros estudios son necesarios para determinar su contribución a la patofisiología de SUH D+