ESTUDIO DE RIESGO VASCULAR Y EFECTO DEL SISTEMA RENINA ANGIOTENSINA (SRA) EN PACIENTES CON ABERRACIONES DEL CROMOSOMA X

ECHEVERRIA, MI; RAMIREZ JM; RENNA NF; MIATELLO RM

Rosario

Congreso; XXXVII Congreso Argentino de Cardiología; 2019

FAC

Se ha incluido 55 pacientes en el estudio. La presencia de aberraciones que afectan el número o la morfología del cromosoma X se consideró como criterio de inclusión. Se excluyeron del estudio aquellos pacientes que no prestaron su conformidad mediante consentimiento informado.Los pacientes se seleccionaron según los registros obtenidos del laboratorio de citogenética del Instituto de Genética de la FCM, UNCuyo.En el Instituto de Genética se actualizaron los datos de las historias clínicas, se detallaron los hallazgos en el examen físico incluyendo entre las variables: peso, talla, circunferencia abdominal y tensión arterial. Se registró los estudios de laboratorio realizados previamente en este grupo de pacientes, con interés particular en aquellas determinaciones de laboratorio relacionadas con riesgo cardiovascular (perfil lipídico, insulinorresistencia, índice HOMA, estudios hormonales y terapéutica de reemplazo).En el grupo de pacientes con síndrome de Turner se amplió el estudio citogenético. Se tomó una muestra de sangre venosa periférica y mediante la técnica de CTAB (bromuro de cetiltrimetilamonio) se extrajo ADN y se cuantificó mediante espectofotometría. A partir de primers específicos para el gen SRY, se aplicó a cada una de esas muestras la técnica de PCR (reacción en cadena polimerasa) y se determinó mediante la misma la presencia de la secuencia génica perteneciente al cromosoma Y. Los productos amplificados se sembraron en gel de agarosa al 2.5%, teñidos con bromuro de etidio y leídos bajo transiluminador UV.Para la medición de la actividad del gen ACE2 en orina se utilizó el Kit de Elisa inmuno-absorvente ligado a enzimas, provisto por la marca BioSource. Este kit utiliza la metodología tipo ELISA sandwich. La placa de microtitulación proporcionada por este kit ha sido previamente recubierta con un anticuerpo específico para ACE2. Las muestras se añadieron a los pocillos de la placa de microtitulación asociadas con un anticuerpo conjugado con biotina específico para ACE2. A continuación, se agregó avidina conjugada con peroxidasa de rábano picante (HRP) a cada pocillo de la microplaca y se incubó 30 minutos a 37 º C. Posteriormente se agregó solución de sustrato TMB. Sólo los pocillos que contenían ACE2, el anticuerpo conjugado con biotina y avidina conjugada con enzima exhibieron un cambio de color. La reacción enzima-sustrato finalizó mediana la adición de solución de ácido sulfúrico y el cambio de color se midió espectrofotométricamente a una longitud de onda de 450nm ± 10nm. La concentración de ACE2 en las muestras se determinó mediante la comparación de la densidad óptica de las muestras a la curva de estándar.En el instituto de Investigaciones Cardiológicas de Cuyo se evaluó a los pacientes utilizando la metodología de ecodoppler vascular. Se realizó exploración mediante ecografía carotídea con un ecógrafo Siemmens Accuson X700 equipado con un software de salud vascular (Syngo Arterial Health Package) y transductor lineal 7.5-12MHz. La pared arterial se exploró en sección longitudinal en tres regiones (ACC: arteria carótida común, BC: bulbo carotídeo y ACI: arteria carótida interna) y se estableció en estos sitios la relación lumen- media para valorar el engrosamiento del complejo íntima media (ECIM). Se obtuvieron imágenes de ecografía en modo B de los segmentos ACC, BC y ACI y los archivos de imagen fueron grabados. Para la determinación de parámetros de disfunción endotelial dinámicos en arteria braquial (DMFB: dilatación mediada por flujo en arteria braquial) se solicitó al paciente concurrir en ayunas. Se colocó el brazo no dominante del paciente en posición extendida e inmovilizado para permitir acceso a la arteria braquial con el transductor. La imagen de la arteria se obtuvo 3 a 7 cm por encima del pliegue antecubital y se registró utilizando un transductor lineal con una frecuencia de 7,5 MHz. Las mediciones se coordinaron al final de la diástole. Luego de la determinación del diámetro arterial se colocó un manguito de presión distal al transductor y se aplicó una presión de 200 mm Hg durante 5 min para luego soltar rápidamente la oclusión. Al minuto de liberada la oclusión se realizaron varias mediciones del diámetro arterial observando la dilatación en respuesta a hiperemia. Durante cada etapa del procedimiento se registró el pulso y presión arterial del paciente.Para la medición de los valores de AngII, en sangre periférica, se utilizó el Kit de ELISA provisto por la marca ENZO LifeScience. Este kit utiliza la metodología tipo ELISA a través de un inmuno ensayo colorimétrico competitivo para la determinación cuantitativa de AngII en plasma o suero humano. La placa de microtitulación proporcionada por este kit ha sido previamente recubierta con un anticuerpo específico para AngII. El cambio de color se midió espectrofotométricamente a una longitud de onda de 450nm ± 10nm. La concentración de AngII en las muestras se determinó mediante la comparación de la densidad óptica de las muestras a la curva de estándar.