Mecanismo de fusión de membranas durante la exocitosis de gránulos corticales en ovocito de ratón

DE PAOLA MM; MICHAUT MA; SAYEGH F; RINALDINI E; CAPPA AI

Mendoza

Jornada; XXIV Jornadas de Investigación y VI Posgrado de la Universidad Nacional de Cuyo; 2016

La exocitosis de gránulos corticales es el mecanismo por el cual el ovocito evita ser fecundado por más de un espermatozoide. Este proceso de fusión de membranas, también conocido como reacción cortical, asegura el éxito de la fecundación y el desarrollo del embrión. Debido a que el mecanismo molecular de la reacción cortical ha sido poco explorado y podría tener implicancias en la implantación del embrión, proponemos: 1) identificar las proteínas SNAP y NSF, y 2) desarrollar un método para estudiar la dinámica de este proceso in vivo. Utilizando RT-PCR y Western blot determinamos que α y γSNAP, están presentes en ovocitos de ratón y confirmamos la expresión de NSF. Por inmunofluorescencia, determinamos que estas proteínas tienen una localización preferentemente cortical, por lo que podrían estar involucradas en la reacción cortical. Propusimos un ensayo funcional, mediante la microinyección de anticuerpos, que muestra que αSNAP y NSF participan en la reacción cortical. Por otro lado, utilizando microscopía de fluorescencia y una cámara de alta resolución desarrollamos un método para analizar la reacción cortical in vivo, que permite caracterizar la cinética de este proceso en ovocitos activados partenogenéticamente. Los resultados obtenidos constituyen un aporte a la ciencia básica de importancia para el área de la clínica reproductiva humana y animal.