IMBECU   20882
INSTITUTO DE MEDICINA Y BIOLOGIA EXPERIMENTAL DE CUYO
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Desarrollo de una vacuna a hemaglutinina recombinante contra el virus de influenza humana
Autor/es:
BOADO, L; ALVAREZ, P; SCODELLER, E; LA TORRE, J; MATTION, N
Lugar:
BuenosAires
Reunión:
Congreso; IX Congreso Argentino de Virología.; 2008
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Virología
Resumen:
El virus de influenza es el agente causal de una de las enfermedades respiratorias agudas con mayor impacto sobre la población humana mundial. Anualmente ocurren epidemias estacionales que representan un problema importante en el orden de la salud pública mundial ya que causan de 20.000 a 50.000 muertes y alrededor de  220.000 hospitalizaciones, a lo que se suma la posibilidad de una pandemia por eventual aparición de cepas aviares transmisibles entre humanos. Actualmente existen en el mercado vacunas convencionales basadas en el cultivo del virus en huevos embrionados que son poco efectivas en la protección de individuos mayores de 65 años. Los nuevos escenarios en la producción de vacunas de influenza incluyen la producción del virus en cultivo de células de mamíferos, producción de proteínas virales recombinantes y más adelante de otros tipos de vacunas de nueva generación (vectores virales, ADN, etc.). Como desafío final, el desarrollo de una vacuna “universal” que no requiera una actualización periódica. Desde hace años se ha identificado a la hemaglutinina viral como la proteína donde residen los epitopes neutralizantes más importantes de este virus (Nayak et al., 1985). Esta glicoproteína puede ser producida en células eucarióticas mediante técnicas de ADN recombinante y ha demostrado ser capaz de inducir muy buena inmunidad protectora en animales de laboratorio y humanos (Treanor JJ, 1996).  El objetivo de nuestro proyecto está orientado a: -Realizar un desarrollo nacional de vacunas contra influenza humana, utilizando tecnología de ADN recombinante y convencional, para ser luego transferido a la industria.  -Contribuir a la provisión de vacunas y a una actualización de cepas vacunales más apropiada para el Hemisferio Sur al posibilitar la producción de las mismas dentro de la región. Metodología: Obtención de ADN copia (ADNc) que codifica la HA a partir de los ARN genómicos por medio de RT-PCR a partir del virus purificado de 3 cepas de influenza. Inserción de los fragmentos en pGEM-T. Secuenciación y selección de los fragmentos con la composición nucleotídica correcta. Inserción de los genes clonados en vectores de transferencia a baculovirus y co-transfección de células de Spodoptera frugiperda con el ADN genómico de AcNPV (BaculoGold). Obtención y selección de clones de baculovirus recombinantes para cada una de las cepas. Purificación de las proteínas y formulación para pruebas de inmunogenicidad y potencia. Resultados: Se amplificaron los fragmentos de ADN conteniendo los genes de HAs de 3 cepas del virus: A/Nueva Caledonia/ 20/99 (H1N1), A/Panamá/2007/99 (H3N2) y B/Yamanashi/166/98. Se secuenciaron los genes insertos y se seleccionaron los fragmentos con la composición nucleotídica correcta para las 3 cepas. Se insertaron los genes clonados en vectores de transferencia a baculovirus (pVL1393, Pharmingen) y se realizó la co-transfección de células de Spodoptera frugiperda. Se obtuvieron múltiples clones de baculovirus recombinantes para cada cepa. Conclusiones: A fin de prevenir una importante morbilidad y mortalidad de la población, la vacunación contra virus de influenza debe presentar un orden prioritario en cuestiones de salud pública nacional. En Estados Unidos la vacuna basada en la hemaglutinina recombinante se encuentra próxima a ser introducida en el mercado. Como se detalló en Resultados, en relación a este proyecto, ya se han obtenido múltiples clones de baculovirus recombinantes para 3 cepas de influenza quedando para la etapa siguiente de trabajo la optimización de los procesos de producción, purificación y control de calidad de la vacuna, con vistas a su futura producción a escala industrial y al cumplimiento de las normas regulatorias vigentes.