Estudio del silenciamiento epigenético de genes supresores tumorales en cáncer de mama

DM MARZESE; FE GAGO; JI OROZCO; B MENDIONDO; FM REAL; O TELLO; LM VARGAS ROIG; M ROQUÉ

Mar del Plata

Congreso; Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC) LII Reunión Científica Anual; 2007

Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC)

EI silenciamiento de genes supresores tumorales (GST) por hipermetilacion de sus promotores es una alteración frecuente en tumores. La detección de estas alteraciones epiqenéticas, además de su gran valor diagnóstico y pronóstico, contribuye a entender el proceso turnorégenico. Existen diversas metodologías para analizar la metilación aberrante, pero a excepción del microarray todas ellas se limitan a estudiar pocos genes. Nuestro objetivo ha sido utilizar la metodologia Methylation Specific Multiplex Ligation Probe Amplification (MS-MLPA) para caracterizar el perfil de melilación de 25 GST de tejido tumoral, ganglio axilar y sangre periférica pre-quirúrgica de pacientes con cáncer de mama. Brevemente esta técnica se basa en la hibridación de 40 sondas, 15 específicas de regiones no metilables y 25 de regiones promotoras de GST frecuentemente metiladas en cáncer de mama. Para estos ensayos, algunas muestras se analizaron por las técnicas Methyl-Specific PCR (MSP) Y Bisulfite Sequencing PCR (BSP). Nuestros resultados indican que la metodología MSMLPA fue efectiva para detectar perfiles de metilación aberrante en distintos tipos de muestras. Se detectó la presencia de metilación de varios GST (como RASSF1 A, APC, BRCA1, DAPK1, CDH 13 y TIMP3) en todos los tumores (n=11) y ganglios axilares (n=3) analizados. A su vez, en 2 de 6 muestras de sangre periférica pre-quirurgica se hallaron perfiles de metilación aberrante, sugiriendo la presencia de células tumorales circulantes. No hemos observado metilación en tejido mamario histológicamente normal ni en fibroadenomas. La utilización de estas herramientas nos permite proyectar la posibilidad de establecer perfiles de metilación aberrante en tumores de diferentes estadíos y orígenes histológicos, como así también la detección de células tumorales circulantes. De esta manera se espera aportar a la detección precoz y al seguimiento de las pacientes oncológicas.su gran valor diagnóstico y pronóstico, contribuye a entender el proceso turnorégenico. Existen diversas metodologías para analizar la metilación aberrante, pero a excepción del microarray todas ellas se limitan a estudiar pocos genes. Nuestro objetivo ha sido utilizar la metodologia Methylation Specific Multiplex Ligation Probe Amplification (MS-MLPA) para caracterizar el perfil de melilación de 25 GST de tejido tumoral, ganglio axilar y sangre periférica pre-quirúrgica de pacientes con cáncer de mama. Brevemente esta técnica se basa en la hibridación de 40 sondas, 15 específicas de regiones no metilables y 25 de regiones promotoras de GST frecuentemente metiladas en cáncer de mama. Para estos ensayos, algunas muestras se analizaron por las técnicas Methyl-Specific PCR (MSP) Y Bisulfite Sequencing PCR (BSP). Nuestros resultados indican que la metodología MSMLPA fue efectiva para detectar perfiles de metilación aberrante en distintos tipos de muestras. Se detectó la presencia de metilación de varios GST (como RASSF1 A, APC, BRCA1, DAPK1, CDH 13 y TIMP3) en todos los tumores (n=11) y ganglios axilares (n=3) analizados. A su vez, en 2 de 6 muestras de sangre periférica pre-quirurgica se hallaron perfiles de metilación aberrante, sugiriendo la presencia de células tumorales circulantes. No hemos observado metilación en tejido mamario histológicamente normal ni en fibroadenomas. La utilización de estas herramientas nos permite proyectar la posibilidad de establecer perfiles de metilación aberrante en tumores de diferentes estadíos y orígenes histológicos, como así también la detección de células tumorales circulantes. De esta manera se espera aportar a la detección precoz y al seguimiento de las pacientes oncológicas.