Efectos de temozolomida (TMZ) sobre la expresión y la interacción de proteínas de golpe de calor (HSPs) y proteínas de reparación del ADN en lineas celulares humanas de glioblastoma.

CASTRO GN; CAYADO GUTIERREZ N; ZOPPINO FC; SOTTILE M; NADIN SB; CUELLO CARRIÓN FD; FANELLI M.A.; CIOCCA DR

Jornada; XIII Jornadas de Investigación de la Facultad de Ciencias Médicas; 2014

Facultad de Ciencias Médicas UNCuyo

Introduccion: Previamente reportamos una asociacion entre HSPA y HSPB1 con astrocitomas de alto grado, lo que sugiere que estas proteinas podrian estar involucrados con el pronostisco de la enfermedad y respuesta al tratamiento. Con el objetivo de comprender mejor los procesos de resistencia/susceptibilidad asociados al tratamiento con temozolomida (TMZ), droga utilizada como terapia estandar en el tratamiento de los gliomas malignos, el presente estudio se realizo en lineas celulares de glioblastoma humano, centrandonos en distintos niveles: (a) indice de apoptosis y senescencia, (b) daño del ADN e (c) interaccion de HSPB1 con proteinas de respuesta al daño del ADN. Materiales y Metodos: Tres lineas celulares de glioma humano (Gli36, U87, y DBTRG,) fueron tratadas con TMZ y se evaluo: viabilidad celular, sobrevida, apoptosis, senescencia, y daño al DNA (ensayo cometa). La expresion de HSPA, HSPB1, O-6-metilguanina-ADN metiltransferasa (MGMT), MLH1, MSH2 se determino por inmunocitoquímica, inmunofluorescencia, y western blot. La inmunoprecipitación se utilizó para analizar la interacción entre proteínas. Resultados: Las tres líneas celulares mostraron diferencias en viabilidad, apoptosis y senescencia luego de la administración de TMZ (Figura 1), ademas de cambios en la expresion de todas las proteinas analizadas (Figura 2). Posteriormente focalizamos nuestro análisis en las células Gli36, estas mostraron reducida capacidad de formar colonias después del tratamiento con la droga (Fig.1), este comportamiento se relaciona con elevados niveles de daño al ADN; sin embargo, las células mantuvieron su viabilidad (Fig.1). En estas celulas, los niveles de MGMT, MSH2, HSPA, y HSPB1 aumentaron significativamente después de la administración de TMZ (Figura 2). Además, se demostro la co-localizacion entre las proteinas MSH2 y HSPB1 por microscopía confocal (Figura 3 a-b). Esta co-localización aumento después del tratamiento con TMZ particularmente en la region nuclear, mediante ensayos de inmunoprecipitación se observo ademas una interaccion entre ambas proteinas. En contraste, HSPB1 no interactuo con MGMT (Fig. 3c). Conclusiones: demostramos efectos biologicos de la TMZ en células de glioma y como este medicamento afecto los niveles de expresión de proteínas de golpe de calor (HSP), MGMT, MSH2, MLH1, todas ellas marcadores pronosticos y predictivos importantes en distintos tipos de cancer. La interacción entre MHS2 y HSPB1 constituye un primer paso para comprender mejor los mecanismos de sensibilidad a la TMZ y podria contribuir con el diseño de nuevas terapias en neuro-oncología. Este es el primer reporte que describe los efectos de la TMZ sobre la interaccion de HSPB1 con una proteína del sistema MMR en células de glioma (Figura 4).