Interacción entre Hsp72 y proteínas del sistema MMR: implicancias en la toxicidad a cisplatino y en la expresión de p73 en células tumorales de colon humano.

MAYRA L. SOTTILE; ANTONELLA LOSSINO; MARIEL A. FANELLI; F. DARÍO CUELLO-CARRIÓN; LAURA M. VARGAS ROIG; SILVINA B. NADIN

Mendoza

Jornada; XIII Jornadas de Investigación de la Facultad de Ciencias Médicas, Universidad Nacional de Cuyo, noviembre 2014; 2014

Facultad de Ciencias Médicas-Universidad Nacional de Cuyo

El cisplatino [cis-diammine-dichloroplatinum (II)] (cPt) es una de las drogas antineoplásicas más utilizadas en el tratamiento de tumores sólidos. Su toxicidad se basa en la formación de aductos intra- o inter-catenarios en el ADN, alterando la replicación del ADN y la transcripción, y conduciendo a la apoptosis [Jordan P. Cell Mol Life Sci 2000;57:1229-35.]. Los aductos de cPt son reconocidos por el sistema de reparación MMR (Mismatch Repair), mediante los heterodímeros MutSα (compuesto por las proteínas MSH2 and MSH6) y MuLα (compuesto por MLH1 y PMS2), que reconocen los malos apareamientos generados por los aductos de cPt-ADN y coordinan la reparación de las lesiones [Jiricny J. Nat Rev Mol Cell Biol 2006;7:335-46] y tras ciclos fútiles de reparación se activan finalmente señales de muerte celular. Deficiencias en el sistema MMR se han asociado con resistencia al cisplatino. [Vaisman A, et al. Cancer Res 1998;58:3579-85]. Las proteínas de golpe de calor (Heat Shock Proteins: HSPs) también se han relacionado con resistencia a drogas antineoplásicas. Hsp72 (HSPA1A, forma inducible de Hsp70 o HSPA), se expresa en elevados niveles en células tumorales y son conocidas sus propiedades antiapoptóticas [Murphy ME. The Hsp70 family and cancer. Carcinogenesis. 2013;34:1181-8]. En los últimos años, diversos estudios han relacionado las HSPs con mecanismos de reparación del ADN [Nadin SB et al. Cancer Lett. 2007; 252: 131-146; Nadin SB et al. Participation of heat shock proteins in DNA repair mechanisms in cancer. In: DNA Repair: Damage, Repair Mechanisms and Aging. New York: Nova Science Publishers; 2010. pp 165?86]. Hsp70 se ha vinculado con el sistema BER (Base Excision Repair) y NER (Nucleotide Excision Repair), pero su asociación con el sistema MMR ha sido escasamente explorada. En base a lo expuesto nuestros objetivos son: a) Determinar la interacción entre las proteínas HSP72, MLH1 y MSH2 en células tumorales de colon humanas expuestas a cPt e hipertermia+cPt y b) Verificar si una hipertermia moderada afecta la sensibilidad a cPt en células tumorales MMR competentes/incompetentes.Este trabajo demuestra por primera vez la interacción directa entre la proteína HSP72 con componentes del sistema MMR (MLH1 y MSH2). El coeficiente de colocalización de Pearson (PCC) resultó superior en células MMR+ tratadas únicamente con cPt. La expresión total de Hsp72 no sufrió cambios significativos 24 hs después del tratamiento con cPt, pero sus niveles se incrementaron en el grupo H+cPt en células MMR+/-. En el caso de MSH2, su expresión fue inducida especialmente en células MMR+ expuestas a H+cPt.La hipertermia potenció la toxicidad del cPt en células MMR+ e incrementó la expresión de p73, sin modificar la expresión de p53 y el cociente Bax/Bcl-2. Nuestros resultados constituyen un punto de partida para establecer si Hsp72 es capaz de modular la sensibilidad a cisplatino a través de proteínas clientes (MLH1 y MSH2) involucradas en el sistema MMR. El creciente conocimiento de nuevos blancos moleculares de las Hsps ha sido de gran utilidad para el desarrollo de inhibidores proteicos para su aplicación en tratamientos oncológicos.