El ácido retinoico reduce la migración de células de cáncer de mama: rol del receptor de ácido retinoico beta

FLAMINI MARINA INES; GAUNA GISEL; VARGAS ROIG LAURA MARIA

Mendoza

Jornada; XII Jornadas de Investigación de la Facultad de Ciencias Médicas de la Universidad Nacional de Cuyo; 2012

Facultad de Ciencias Médicas de la Universidad Nacional de Cuyo.

En trabajos previos llevados a cabo por este laboratorio se observó que la metilación del gen que codifica al receptor del ácido retinoico beta (RAR-beta) en tumores primarios de mama se correlaciona con la invasión del ganglio centinela. Conociendo que los intentos para identificar las bases moleculares implicadas en la metástasis son fundamentales para la predicción temprana de la evolución de la enfermedad y el desarrollo de nuevas terapias moleculares, es que el presente proyecto propone verificar si la metilación aberrante del gen RAR-beta se correlaciona con mayor agresividad del tumor, es decir aumento en la migración e invasión, procesos fundamentales en el desarrollo de metástasis. OBJETIVOS: Nuestra hipótesis es que el RAR-beta está involucrado en la migración e invasión celular. Así la metilación y silenciamiento del gen RAR-beta en células tumorales mamarias se correlaciona con mayor migración e invasión celular. Los objetivos específicos del presente trabajo son: 1) Verificar en células MCF7 (RAR-beta metilado y silenciado) si la re-expresión del gen, después del tratamiento con ácido retinoico (AR), inhibe la migración celular. 2) Determinar en células T47D (RAR-beta expresado) si silenciando este gen aumenta la migración celular. 3) Identificar los posibles mecanismos moleculares por los cuales AR/RAR-beta ejerce su efecto. MATERIALES Y MÉTODO: Para poner a prueba la hipótesis planteada se utilizó la línea de adenocarcinoma de mama T47D que por bibliografía se sabe que no tiene metilado el promotor de RAR-beta y se compararon los resultados con los obtenidos en la línea celular MCF7 carcinoma de mama invasivo que sabemos que si tiene metilada dicha región génica. En células MCF-7 se realizaron tratamientos de dosis (10-8 a  10-5 M) y tiempo dependencia (24 a 96hs) con ácido retinoico (AR). Se realizaron ensayos de viabilidad (MTT), migración celular y mediante western blot se evidenció la expresión de RAR-beta, moesin, c-Src, HSP27 (HSPB1) y actina en ambas líneas celulares. RESULTADOS: Los ensayos de viabilidad celular (MTT) en células MCF7 y T47D demostraron que 72hs de incubación con AR no reduce la viabilidad celular salvo en la línea MCF7 cuando se  administran elevadas  concentraciones (10 µM) donde la viabilidad disminuye un 20%. Además observamos que en la línea MCF7 se produce una inhibición de la migración celular en un 60% (p