IMBECU   20882
INSTITUTO DE MEDICINA Y BIOLOGIA EXPERIMENTAL DE CUYO
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Angiotensina regula la expresión de subunidades del complejo NADPH oxidasa en fibroblastos de adventicia de ratas espontáneamente hipertensas.
Autor/es:
REDONDO,ANALIA; CRUZADO MONTSERRAT; CASTRO CLAUDIA; MARTÍNEZ, JOAQUIN
Lugar:
Tigre, Provincia de Buenos Aires
Reunión:
Congreso; XXXIII Reunión Científica Anual del Consejo Argentino de Hipertensión Arterial,; 2012
Resumen:
Angiotensina regula la expresión de subunidades del complejo NADPH oxidasa en fibroblastos de adventicia de ratas espontáneamente hipertensas Introducción: La hiperplasia de la capa media es una importante respuesta a la lesión vascular en patologías cardiovasculares como la hipertensión arterial. La proliferación y migración de células musculares lisas vasculares y, más recientemente, de miofibroblastos de la adventicia están implicados en el estrechamiento de la luz arterial en respuesta a una lesión. Diversos estudios han implicado a las especies reactivas del oxígeno (ROS), derivadas del complejo enzimático NADPH oxidasa (Nox), en la proliferación y migración de células vasculares y por lo tanto en el crecimiento de la capa media. El complejo Nox es un sistema enzimático generador de ROS y la Angiotensina II (AII) es el estimulante hormonal modelo de este sistema. Nos propusimos caracterizar el complejo Nox en células fibroblásticas obtenidas de adventicias de aorta (Fb-Adv) de ratas espontáneamente hipertensas (SHR) y evaluar el efecto de la AII sobre la generación de ROS en este tipo celular. Materiales y Métodos: Cultivo celular: los Fb-Adv fueron cultivados en DMEM/F12 suplementado con 10% de SFB y se utilizaron entre pasaje 3 a 9. Medición de ROS: Se midió la producción de ROS mediante ensayo fluorométrico, utilizando la sonda CM2-DCF-DA (clorometil-dicloro fluoresceína diacetato). Western Blot: Se evaluó la expresión de Nox2, Nox 4 y p47-phox mediante anticuerpos específicos, sobre extracto total de fibroblastos. Resultados: AII aumentó las ROS en los Fb-Adv, (1.00±0.03 URF a 1.32±0.20 URF) y este efecto fue revertido por Apocinina, un inhibidor específico de la enzima NADPH oxidasa (0.88±0.05 URF). Mediante western blot se encontró que los Fb-Adv expresan las isoformas Nox2 y Nox4, siendo la expresión de Nox4 el doble de Nox2. Esta expresión de las Noxs aumentó luego de estimular los Fb-Adv con AII o peróxido de hidrógeno (H2O2) indicando una posible retroalimentación positiva por parte del complejo enzimático. Debido a la dependencia de Nox2 con respecto a las subunidades citosólicas, evaluamos también la expresión de una de ellas, p47-phox, los resultados indicaron un aumento de la expresión esta subunidad cuando se estimuló con AII o H2O2. Conclusiones: Las ROS que se generan en la pared de la adventicia de aortas de SHR provendrían del sistema Nox, siendo Nox4 la isoforma de mayor expresión. AII y H2O2 serían reguladores de la actividad y la expresión de algunas subunidades del complejo Nox presente en la adventicia.