Evaluación de un ligando de TLR4 como adyuvante de una vacuna de nueva generación para influenza humana

CARGNELUTTI DE; SCODELLER E.A.

Curitiba

Jornada; XX Jornadas de Jovens Pesquisadores da Associacao de Universdades do Grupo Montevideo; 2012

Universidade Federal do Paran¨¢

Introducción: La gripe o influenza es una enfermedad respiratoria aguda con un elevado impacto sobre la salud pública mundial. Su agente causal es el virus de influenza y la vacunación es la mejor estrategia para controlar la infección. El uso de la nucleoproteína (NP) del virus de influenza como ant¨ªgeno vacunal deriva del hecho de que la NP muestra una menor variación antigénica respecto a las glicoprote¨ªnas de la superficie viral, por lo tanto la NP se presenta como una proteína altamente conservada entre los distintos subtipos del virus de influenza, con un porcentaje de conservación del 89%. Existen adyuvantes que coadministrados con antígenos recombinantes facilitan la inducción de una respuesta  inmune celular. Tal es el caso del lípido A monofosforilado (MPLA). El MPLA es un derivado del lipopolisac¨¢rido de Salmonella minesota R595, su actividad adyuvante reside en la propiedad de ser un ligando de un receptor tipo toll 4 (TLR4), con la consecuente activación e inducción en la producción de citoquinas por parte de monocitos, neutrófilos y células dendríticas. Además, nuevas tecnologías son necesarias para la producción de antígenos vacunales gripales, debido a que la producción de antígenos en huevos embrionados de gallina y su posterior purificación es un proceso  complejo y con limitaciones en su capacidad de expansión. Objetivo: El objetivo del presente trabajo es describir la producción de la nucleoproteína recombinante (NPr) del virus de influenza A/Puerto Rico/8/34 (H1N1), y evaluar su potencial antigénico al formularla con el adyuvante MPLA. La combinación del adyuvante completo de Freund y el adyuvante incompleto de Freund, capaz de generar una fuerte respuesta inmune del tipo Th1, fue seleccionado como est¨¢ndar de comparación. Materiales y métodos: El gen de la NP del virus de influenza A/Puerto Rico/8/34 (H1N1) fue insertado en el vector pET-30a, generando el vector recombinante pET-30a-NP, y usado para expresar la proteína recombinante en células de Escherichia coli BL21 (DE3). Ratones hembras BALB/c, fueron vacunados por vía subcut¨¢nea con un régimen de prime/boost homólogo con 10 ug de la NPr formulada en buffer fosfato (NPr-PBS), 10 ug de la NPr emulsionada con el adyuvante completo de Freud/adyuvante incompleto de Freud (NPr-CFA/IFA) y con 10 ug de la NPr formulada con 25 ug de MPLA (NPr-MPLA). En el día 36 post-prime, se evaluó   la respuesta inmune humoral determinando el título de IgG total y de los isotípos IgG1 e IgG2a. Al mismo tiempo, la repuesta inmune celular fue evaluada por la determinación de las citoquinas IFN-g, IL-10 e IL-4. Resultados: La inmunización con la NPr indujo seroconversión en todos los grupos. Sin embargo, la NPr formulada con MPLA, incrementó el título de IgG anti-NP con un media de 12.800, además generó un aumento en la proporción IgG2a/IgG1, desde 0,045 a 0,92. La inmunización con NPr-MPLA resultó en un incremento significativo en la producción de IFN-g (p <0,05), en comparación con la formulación NPr-PBS. No se registraron diferencias significativas en la producción  de IL-10 entre los grupos, mientras que los valores de IL-4 no fueron detectables. Conclusiones: Este trabajo demuestra que la inmunización subcutánea de ratones BALB/c con una formulación vacunal basada en la NPr del virus de influenza A/Puerto Rico/8/34 (H1N1), combinada con el adyuvante MPLA, induce una fuerte respuesta inmune humoral y celular antígeno específica del tipo Th1. Por lo tanto, esta formulación, debe ser evaluada en ensayos de desafío contra virus patógeno. Una formulación vacunal basada en la NPr adyuvantizada se presenta como una posible estrategia en el desarrollo de una vacuna de nueva generación contra influenza humana.