IMBECU   20882
INSTITUTO DE MEDICINA Y BIOLOGIA EXPERIMENTAL DE CUYO
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Olaparib potencia el efecto de doxorrubicina en células de cáncer de mama triple negativo MDA-MB-231
Autor/es:
SOTTILE MAYRA L; GÓMEZ LAURA C; TRONCOSO MARIANA E; DE CAMPOS-NEBEL MARCELO; REDONDO ANALÍA L; VARGAS ROIG LAURA M
Lugar:
Mendoza
Reunión:
Congreso; I Congreso Interuniversitario I+D+i Mendoza; 2021
Resumen:
El cáncer de mama (CM) es una enfermedad de elevada incidencia y la primera causa de muerte por tumores en mujeres en nuestro país. El 10-20% de los tumores malignos de mama pertenecen al subtipo triple negativo (TN) y se caracterizan por no expresar receptor de estrógenos, receptor de progesterona ni receptor del factor de crecimiento epidérmico 2. El carcinoma TN es más agresivo, con mayor riesgo de metástasis y mortalidad en relación a los otros subtipos moleculares. Otra característica de este subtipo tumoral es la ausencia, hasta la fecha, de un blanco terapéutico. Por eso, el tratamiento estándar continúa siendo la administración de quimioterapia con drogas convencionales. La doxorrubicina es una droga de primera línea en CM TN y su mecanismo de acción se basa en la generación de rupturas de simple (RSC) y doble cadena (RDC) en el ADN. Una de las limitantes para su uso es la aparición de efectos no deseados y de resistencia a la quimioterapia. El desarrollo de esquemas terapéuticos que permitan mejorar la sobrevida de los pacientes con CM TN es un desafío actual para la oncología. En los últimos años, los inhibidores de la enzima PARP (PARPi) han surgido como una de las estrategias más prometedoras. Sin embargo, los PARPi han sido aprobados únicamente para el tratamiento del CM con mutaciones germinales en genes BRCA. PARP1 es una proteína clave involucrada en el sistema de reparación del ADN por escisión de bases. Los PARPi impiden la liberación de los complejos PARP-ADN que se forman en presencia de RSC, inhibiendo la reparación y provocando RDC. Debido a que doxorrubicina origina daños en el ADN que requieren de la actividad de PARP1 para su reparación, el uso combinado de este agente antitumoral y de PARPi podría resultar en una estrategia prometedora para el tratamiento del CM TN, independientemente de la presencia de mutaciones en genes BRCA. El objetivo de este trabajo consistió en estudiar el efecto del PARPi olaparib en la sensibilidad a doxorrubicina en células de CM TN MDA-MB-231 proficientes en BRCA. Las células de CM fueron transfectadas establemente con un plásmido shPARP1mir. Para estudiar la eficiencia de la transfección, se evaluó la expresión de PARP1 por western blot. Las líneas celulares MDA-MB-231 wild-type (wt) y shPARP1 fueron expuestas a distintas dosis de doxorrubicina para estudiar su viabilidad celular por MTT. Se realizó ensayo clonogénico en la línea celular MDA-MB-231 wt administrando concentraciones crecientes de doxorrubicina (2.5-40 nM), olaparib (1-50 µM) o doxorrubicina (2.5-40 nM) + olaparib (1 µM) durante 24 h. Se analizó la interacción farmacológica según el método de Chou-Talalay, en el cual un índice de combinación (CI) < 1 indica sinergismo, un CI=1, adición y un CI > 1, antagonismo. Se realizó inmunofluorescencia de γH2AX para evaluar el daño en el ADN inducido por la administración individual o simultánea de doxorrubicina y olaparib, empleando para cada fármaco las dosis establecidas por ensayo clonogénico. Para estudiar el daño en el ADN, un grupo de células fue fijado inmediatamente finalizados los tratamientos (T0), y otro grupo se dejó recuperar 24 h a 37 °C post tratamientos (T24). Los resultados obtenidos en el silenciamiento de PARP1 mostraron que las células MDA-MB-231 que no expresan esta enzima fueron más sensibles a la doxorrubicina que su contraparte wt. En el ensayo clonogénico sólo se obtuvieron colonias viables para concentraciones de doxorrubicina ≤ 20 nM cuando se administró simultáneamente con el PARPi olaparib. En los estudios de interacción farmacológica, se obtuvo un CI