DESARROLLO DE UNA METODOLOGÍA ANALÍTICA BASADA EN MICROEXTRACCIÓN MICELAR PARA DETERMINAR ABACAVIR, EFAVIRENZ, LAMIVUDINA Y NELFINAVIR EN PLASMA HUMANO MEDIANTE ESI-LC-MS/MS

HUNZICKER, G.; HERNANDEZ, SILVIA; ALTAMIRANO, JORGELINA C.

Córdoba

Congreso; Primer Congreso Argentino de Espectrometría de Masa; 2012

Desde su surgimiento en 1996, el tratamiento antirretroviral de gran eficacia (TARGA) permitió a los pacientes infectados con el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) obtener importantes mejoras en su salud y su calidad de vida, así como disminuir la morbilidad y mortalidad asociadas a la infección. Cuando el tratamiento se realiza estrictamente como ha sido indicado, los beneficios incluyen un aumento del número de linfocitos T CD4, un descenso de la carga viral y una disminución notable de la probabilidad de progresión a SIDA y muerte. Debido a la gran complejidad que presenta el manejo del paciente infectado por el VIH, resulta más probable que respondan al tratamiento aquellos cuyo régimen de dosis se ha determinado en base a la concentración plasmática de los agentes antirretrovirales (ARVs), que aquellos individuos que siguen un régimen estándar y fijo. La información de las concentraciones plasmáticas de los ARVs permite diseñar el tratamiento y atenuar los posibles efectos tóxicos de estos fármacos. El propósito de este trabajo fue desarrollar una metodología analítica basada en la técnica de microextracción micelar para monitorear terapéuticamente Abacavir, Efavirenz, Lamivudina y Nelfinavir en plasma humano mediante ESI-LC-MS/MS. Para la etapa de microextracción micelar1,2, una alícuota de 500 µL de plasma humano se diluyó con 2000 µL de H2O ultrapura en un tubo de centrífuga de 10 mL al que se le adicionaron 500 µL de Triton X-114. La mezcla fue homogeneizada empleando un agitador tipo vortex. Posteriormente el sistema se equilibró a 65°C en un baño termostático durante 20 minutos, al tiempo que se observó turbidez en el tubo debido a la formación de las micelas. A fin de acelerar la separación de la fase coacervato del seno de la solución acuosa, el tubo se centrifugó a 3000 g durante 5 minutos. Luego de descartar el sobrenadante, se agregaron 400 µL de acetonitrilo para precipitar las proteínas homogenizando y centrifugando como se mencionó anteriormente. Una alícuota de 150 µL se transfirió a un vial de 2 mL diluyendo con 400 µL de H2O ultrapura para su análisis mediante ESI-LC-MS/MS. Se optimizó la concentración de Tritón X-114 en el rango de 10 a 100 g L-1, pH de extracción en el rango de 2,5 a 11,5 y modificadores como sales, ácidos y alcoholes. Bajo condiciones óptimas tales como: concentración de Triton X-114 a 50 g L-1; pH a 7,5; condiciones de equilibrio de 20 minutos a 65°C; la microextracción micelar puede ser aplicada con éxito en la extracción y concentración de Abacavir, Efavirenz, Lamivudina y Nelfinavir en plasma humano con límites de detección (LDD) en el rango de 3 a 40 µg L-1, adecuados para aplicaciones del mundo real. Un aspecto importante a destacar de la técnica de microextracción propuesta, es el bajo consumo de solventes orgánicos y la elevada eficiencia de extracción lo que permite obtener una metodología sensible, selectiva, reproducible, rápida y versátil.