INVESTIGADORES
ALANIZ Laura Daniela
congresos y reuniones científicas
Título:
EL PAPEL DE SPARC (PROTEÍNA SECRETADA, ACÍDICA Y RICA EN CISTEÍNAS) EN LA FIBROSIS HEPÁTICA. EFECTOS BIOLÓGICOS IN VIVO E IN VITRO
Autor/es:
ATORRASAGASTI C; AQUINO JB; MALVICINI M; ALANIZ L; SILVA M; PODHAJCER O; MAZZOLINI G
Reunión:
Congreso; XVI Congreso Argentino de Hepatología; 2011
Resumen:
Introducción: La fibrosis hepática se caracteriza por una excesiva acumulación de componentesde la matriz extracelular (MEC) y cambios en las interacciones celulares que conducen a unadistorsión del parénquima hepático y finalmente insuficiencia hepatocelular. SPARC es una glicoproteínade la MEC con diversas funciones biológicas que se encuentra sobreexpresada en hígadoscon cirrosis y en células estrelladas hepáticas (CEH). Su papel biológico se relaciona conla remodelación tisular, migración celular y adhesión, entre otras funciones. Hemos observadoque la transferencia génica mediada por adenovirus de una secuencia antisentido para SPARCfue capaz de atenuar el proceso necroinflamatorio y disminuir la fibrosis en un modelo de intoxicacióncon TAA (tioacetamida) en ratas.Objetivos: Estudiar el papel de SPARC en el desarrollo de la fibrosis hepática utilizando ratonesknock-out para SPARC (null) y explorar in vitro en CEH los mecanismos de atenuaciónde la fibrosis al inhibir SPARC. M&M: Se indujo fibrosis mediante la administración crónicade TAA y por ligadura del conducto colédoco. Se evaluó el grado de fibrosis y la actividad necroinflamatoria.Se cuantificaron los depósitos y el estado de maduración de las fibras de colágenopor tinción de rojo sirio. Se evaluó la activación de las CEH por inmunohistoquimica paraactina alfa de músculo liso. Por PCR en tiempo real (qPCR) se estudió la expresión de colágenoy TGF-ß1. Se utilizaron líneas celulares de CEH humanas y de rata, así como tambiéncultivo primario de rata. La expresión de SPARC fue evaluada por qPCR e inmunofluorescencia(IF). Se utilizó ARN de interferencia para inhibir la proteína. Se estudió la expresión de colágenoy de TGF-ß1 por ELISA y qPCR. Se evaluó la migración en cámara transwell.Resultados: El desarrollo de fibrosis induce la expresión de SPARC en hígado. Los ratonesSPARC null presentaron una significativa atenuación del desarrollo de fibrosis. Se observó disminuciónen los depósitos de colágeno (2,06±0,2 vs 4,37±0,8; null vs wt), en la actividad necro-inflamatoria (índice de Knodell: 13,25±1,2 vs. 7,33±1,5; wt vs. null) y en la transdiferenciaciónin vivo de las CEH hacia un fenotipo activado (0,11±0,01 vs. 0,45±0,02; null vs wt).Se observó disminución en la expresión de colágeno y se detectaron fibras de colágeno finas einmaduras. Coincidentemente se observó disminución en la expresión y en los niveles sistémicosde TGF-ß1 en ratones (489,1±59 vs. 936±83 pg/ml, null vs wt). Se inhibió la expresión deSPARC en CEH in vitro y se observó reducción de diferentes mecanismos fibrogénicos comoinhibición de la migración celular en respuesta a estímulos quimiotácticos, disminución de lasíntesis de colágeno y de la producción de TGF-ß1.Conclusiones: En éste trabajo se presentan evidencias que demuestran un papel central deSPARC en fibrosis hepática, identificando a SPARC como un blanco potencial para el tratamientode esta patología