INHIBICIÓN IN VITRO DE LA EXPRESIÓN DE SPARC (SECRETED PROTEIN, ACIDIC AND RICH IN CYSTEINE) EN CÉLULAS ESTRELLADAS HEPÁTICAS. EFECTOS BIOLÓGICOS

CATALINA ATORRASAGASTI; ALEJANDRA CAMINO; JORGE AQUINO; LAURA ALANIZ; MARIANA MALVICINI; MIGUEL RIZZO; PABLO MATAR; OSVALDO PODHAJCER; MARCELO SILVA; GUILLERMO MAZZOLINI

Mar del Plata, Bs. As. Argentina

Congreso; LIII reunion anual de la SAIC, conjuntamente con la reunion de SAIFS; 2008

SAIc-SAIFS

Introducción: Hemos observado previamente que la transferencia génica mediada por adenovirusde una secuencia antisentido para SPARC (AdasSPARC) fue capaz de atenuar el procesonecroinflamatorio y disminuir la fibrosis hepática en un modelo de intoxicación crónica con TAA(tioacetamida) en ratas (Camino A 2008, J. of Gene Med, 10:993-1004). La células estrelladashepáticas (CE) desempeñan un papel fundamental en el proceso fibrogénico hepático.Objetivos: Explorar in vitro en CE los mecanismos de atenuación de la fibrosis al inhibir SPARC.Materiales y Métodos: Se utilizó una línea de CE, denominada CFSC-2G. La expresión de SPARC fue evaluada por qPCR e inmunofluorescencia. Se utilizó el AdasSPARC para inhibir la proteína. Para incrementar la inhibición de SPARC se emplearon ARN de interferencia específico (siRNA). Se estudió la expresión de la citoquina TGF-β1 por ELISA. Se evaluó proliferación celular por el método de incorporación de timidina tritiada y la migración en cámaras transwell. Resultados: AdasSPARC redujo en un 50% la expresión de SPARC a los 5 días de la infección comparado con los controles. Esto se correlacionó con disminución en la secreción de TGF-β1, principal citoquina fribrogenica, comparado con Adβgal (vector control). El siRNA redujo la expresión del ARNm de SPARC a las 72 hs (80% de reducción vs. control). La migración de las células CFSC-2G transfectadas con siRNA disminuyó significativamente (p=0,003), así como la respuesta migratoria a TGFβ1. La secreción de TGFβ1 en el sobrenadante de las células transfectadas con el siRNA para SPARC fue menor que las tratadas con el siRNA control. Conclusiones: La regulación negativa de la expresión de SPARC en CE resulta en una disminución de la capacidad migratoria de las células estrelladas activadas, especialmente en respuesta a TGF-β1, así como la producción de TGF-β1. SPARC podría ser considerada un nuevo blanco terapéutico en fibrosis hepática.