Selección de cepas del género Acremonium productoras de diglicosidasas

BRAUN L; WEIZ G; MANSILLA I ; BRECCIA J

Jornada; xii jornadas pampeanas de ciencias naturales; 2016

Los flavonoides son polifenoles ampliamente distribuidos en el reino vegetal. En general, éstos se encuentran diglicosilados y las agliconas (fracción no glicosilada de la molécula) pueden poseer diferentes actividades biológicas, estabilidad química, biodisponibilidad y/o farmacocinética respecto al flavonoide original. Las diglicosidasas nos permiten obtener la aglicona en una sola reacción, dado que catalizan la hidrólisis del enlace heterosídico de los flavonoides. Hasta el momento fueron descriptas sólo cinco actividades diglicosidasas de origen eucarionte (vegetales y fúngicas). Se realizó una búsqueda de diglicosidasas en 32 cepas del género Acremonium, dirigida a los flavonoides hesperidina, diosmina y rutina. Cuando los hongos se cultivaron con los flavonoides hesperidina y diosmina no se detectaron halos de hidrólisis, mientras que 21 cepas fueron capaces de hidrolizar rutina. Ahora bien, la clarificación o hidrólisis del flavonoide no indica la estrategia de desglicosilación. La actividad diglicosidasa se detectó en sólo 7 cepas mediante análisis zimográfico con el sustrato sintético metilumbeliferil-rutinósido. De estas 7 cepas, se seleccionó Acremonium sp. 959-1 por presentar la banda de actividad con mayor Rf (menor peso molecular aparente) sin embargo este microorganismo no creció en cultivo sumergido. Por esta razón se decidió seleccionar Acremonium strictum DMIc 093557, que posee una banda de similar Rf a la anterior. En cultivo sumergido (25 ºC, pH 5) con rutina como fuente de carbono, la producción de actividad desglicosilante fue máxima luego de 9 días de crecimiento (8,6 ± 0,8 U/L). Los productos de reacción de la hidrólisis de rutina se identificaron como rutinosa y quercetina, confirmando la producción de actividad diglicosidasa. Este mecanismo de desglicosilación es poco frecuente y se pretende poder secuenciar este péptido para su posterior caracterización dado el potencial de aplicación de estos catalizadores y la ventaja de tener acceso al genoma completo de A. strictum.