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Las diglicosidasas hidrolizan diglicoconjugados principalmente de origen vegetal (flavonoides, terpenos, etc), liberando el disacárido en un solo paso y esta reacción presenta interés tecnológico en biotransformaciones de alimentos. El microorganismo procariota, Actinoplanes sp. SES 612 fue seleccionado en nuestro laboratorio como productor de actividad diglicosidasa. Dado que los valores de actividad obtenidos fueron bajos, el objetivo de este trabajo fue aumentar el título modificando las condiciones de cultivo. Actinoplanes sp. SES612 fue cultivado en placas con hesperidina como única fuente de carbono (0.5%p/v), extracto de levadura (0.1%p/v) y a este medio se le adicionaron diferentes fuentes de nitrógeno (0.2%p/v). Las actividades máximas extraídas desde el agar clarificado fueron 35, 38, 51 y 78 U/L cuando los aditivos fueron peptona de carne, de soja, de caseína y harina de soja, respectivamente. Si bien, la actividad en el medio de harina de soja fue la más alta, esta fue detectada a los 15 días de incubación mientras que con peptona de caseína presentó la máxima actividad a los 5 días de crecimiento. El microorganismo mostró dificultades para crecer en cultivos sumergidos con agitación bidireccional y hesperidina como fuente de carbono. Sin embargo se logró cultivar en un reactor de 0.17 L volumen de trabajo. Cuando se utilizaron pellets de cáscara de naranja como fuente alternativa del flavonoide, se encontró la coproducción de la actividad β-glucosidasa extracelular (2.8 U/L) junto a la diglicosidasa (11 U/L) luego de 3 días. Mientras que con hesperidina como fuente de carbono produjo solo 3.6 U/L de diglicosidasa. Sin bien es necesario considerar un paso de separación de las actividades endo y exo β-glucosídicas, se estima que los pellets de naranja serán el sustrato de elección para escalar la producción de la actividad en vista a su purificación.