Clonado, expresión y análisis funcional en E.coli de un quimiorreceptor de aminoácidos de P.putida

HERRERA SEITZ, KARINA; SOTO, DÉBORA; STUDDERT, CLAUDIA

Montevideo

Congreso; Congreso de la ALAM 2010; 2010

Asociacion Latinoamericana de Microbiologia

La cascada de transducción de señales involucrada en la quimiotaxis está conservada en bacterias y arqueas, presentando sólo algunas variaciones. Los genes que codifican las proteínas quimiorreceptoras y transducen la señal al motor flagelar poseen un dominio de señalización altamente conservado. Este dominio está implicado en la interacción con la histidín quinasa cuya actividad es modulada en respuesta a los estímulos. En E.coli, receptores de igual o diferente especificidad están organizados en trímeros de dímeros. Las interacciones “dímero-dímero” involucran una región del dominio de señalización. Esta organización de los quimioreceptores podría tratarse de una característica conservada fundamental para el correcto funcionamiento de los quimiorreceptores. Para poner a prueba esa hipótesis, en nuestro laboratorio se está analizando la estructura y función de receptores de otros microorganismos. En primer lugar, se llevó adelante el clonado y expresión de un quimiorreceptor de aminoácidos de P.putida (pctApp). El gen fue clonado, expresado y reconocido por anticuerpos generados contra el dominio citoplasmático conservado de los receptores de E.coli. La expresión de PctApp no restauró la respuesta quimiotáctica a serina en una cepa de E.coli sin sus receptores nativos en placas de agar blando. En cambio, sí restauró su capacidad de responder a serina en un ensayo que permite observar en forma directa el sentido de rotación del flagelo. Este resultado indica que PctApp interactúa con y controla a la quinasa de E.coli, probablemente mediante interacciones y cambios conformacionales que comparte con los receptores nativos de E.coli. La deficiencia en la complementación se debería a un defecto en la respuesta de adaptación. Estudios de crosslinking in vivo indican que pctApp no fue incorporado en trímeros de dímeros mixtos con los receptores de E.coli. Los resultados presentados y futuros estudios de quimiorreceptores heterólogos, contribuirán a dilucidar si la organización espacial de los receptores es una característica conservada.