LA VÍA MITOCONDRIAL ADX-ADXR-P450 ES ESENCIAL PARA EL DESARROLLO GAMETOFÍTICO EN A. THALIANA

SETZES N, DISTEFANO A, BELLIDO A, FIOL DF, ZABALETA E, PAGNUSSAT GC.

Chascomús

Taller; IV Taller de Biología celular y Desarrollo; 2018

Las plantas que se reproducen sexualmente alternan entre dos generaciones: gametofito y esporofito.Los gametofitos cons=tuyen estructuras haploides que poseen un rol clave en la reproducción sexual,dado que en ellos se especifican las gametas necesarias para la fecundación. En nuestro laboratorio,hemos iden=ficado y estudiado mutantes de Arabidopsis thaliana con una inserción en genes nuclearesque codifican tanto para una adrenodoxina (ADX) como para una adrenodoxina reductasa (ADXR),ambas mitocondriales. En mitocondrias de insectos y mamíferos, ADX par=cipa de una transferencia deelectrones desde NADPH hacia ADXR y finalmente, hasta un citocromo P450 (P450), una vía quecons=tuye un paso clave en la síntesis de hormonas esteroideas. A su vez, gracias a ensayos decomplementación bimolecular de la fluorescencia (BIFC) y a estudios de doble híbrido (Y2H), hemosestablecido que cuatro P450s de Arabidopsis (CYP711A1, CYP90A1, CYP75B1, CYP71B9) interactúan conADX1. También hemos demostrado que estos P450s poseen localización mitocondrial medianteexperimentos de co ? localización realizados en N. benthamiana. Aun así, mutantes nulas para estosP450s no muestran defectos gameto?=cos, posiblemente debido a un fenómeno de redundanciafuncional. Para corroborar esto, realizamos cruces con el fin de obtener mutantes dobles yencontramos que la mutante doble hemicigota para CYP711A1 y CYP90A1 mostró un 25% de semillasabortadas, un número que da cuenta de un defecto gameto?=co. Analizamos sacos embrionariosprovenientes de esta mutante mediante microscopia DIC y encontramos defectos en el desarrollosimilares a aquellos observados en mutantes ADXR. Por úl=mo, estudiamos los patrones de expresiónde ambos P450s mediante el uso de líneas reporteras con GFP y/o GUS.