Detección de glicoproteínas diferenciales en una mutante de la proteasa RhoII en la haloarquea Haloferax volcanii.

FOLTRAN, ROCIO; DE CASTRO , ROSANA; GIMÉNEZ, MARIA INES

Mar del Plata

Encuentro; X Encuentro Biólogos en Red (BER); 2015

Asociación Jóvenes Investigadores en Formación (AJIF)

Detección de glicoproteínas diferencialesen una mutante de la proteasa RhoII en la haloarquea Haloferax volcaniiFoltran, Rocío Beatriz, De Castro, Rosana , Giménez, MaríaInés. Instituto de investigaciones Biológicas, IIB-CONICET-UNMDP         Las proteasas romboides son proteínas integrales de membrana representadasen los tres Dominios de la vida. Con el fin de comprender su rol en las arqueasse generó una mutante nula en el gen rhoII que codifica para un homólogode proteasas romboides, en la arquea halófila Haloferax volcanii. Lacepa obtenida (MIG1) presentó dos bandas diferenciales en geles depoliacrilamida (SDS-PAGE) correspondientes a glicoproteínas, identificadas comola glicoproteína de la capa S (GCS) y un transportador de la familia ABC. La GCS ha sido caracterizada como modelo de glicosilación de proteínasen haloarqueas y se ha propuesto que modificaciones en su glicosilaciónparticiparían en la adaptación al medio salino en H. volcanii. Si bienlos oligosacáridos previamente reportados se encontraban presentes en la cepaparental y en MIG1, un oligosacárido nuevo descripto en el marco de esteproyecto, se encontró truncado en la cepa mutante, sugiriendo que RhoII podríacumplir un rol en la N-glicosilación proteica en H. volcanii.Para determinar si la mutación produce un efecto sobre la glicosilación deotras proteínas además de GCS, se enriquecieron muestras correspondientes aextractos celulares (EC) y medio de cultivo libre de células (MC) de ambascepas mediante cromatografía de afinidad en Concanavalina A ?Sepharosa. Lasproteínas eluídas de la columna fueron comparadas mediante SDS-PAGE. En las doscepas se observaron proteínas retenidas por la columna de aproximadamente 90,25y 27 kDa para los EC y 29, 31 y 35 kDa para MC que, por sus PM,corresponderían a glicoproteínas no descriptas previamente. Algunas de estasproteínas se enriquecieron diferencialmente sugiriendo que su glicosilacióntambién podría estar afectada en MIG1. La identificación y análisis de dichasglicoproteínas resulta de interés para establecer el efecto de la mutación  rhoII en la glicosilación de proteínasen H. volcanii. Financiado por UNMDP y CONICET.