Estudios sobre amilasa de hepatopáncreas del cangrejo eurihalino Neohelice granulata

A. ASARO; R.A. PAGGI; R.E. DE CASTRO; A.A. LÓPEZ MAÑANES

Mar del Plata

Encuentro; X Encuetro Biológos en Red (BER); 2015

Asociación de Jóvenes Investihadores en Formación

Estudiossobre amilasa en hepatopáncreas del cangrejo eurihalino Neohelice granulataANTONELA ASARO1* Roberto Alejandro Paggi2*,Rosana  Esther de Castro2, y  Alejandra Antonia López Mañanes1 1IIMyC, UNMdP-CONICET, Mar del Plata.  2IIB, UNMdP-CONICET, Mar del Plata. *Estos autores contribuyeronigualmente al trabajoE-mail:antonela_asaro@hotmail.comLasamilasas tienen una importancia fisiológica central debido a su papel en ladigestión inicial de sustratos glicogénicos tales como almidón y glucógeno. Sinembargo, la información sobre amilasas en hepatopáncreas de cangrejoseurihalinos es aún escasa y fragmentaria. Nuestro objetivo fue determinar la presenciade diferentes formas, realizar una purificación y caracterización parcial de amilasaen hepatopáncreas de N. granulata.Machos adultos se mantuvieron 10 días en 35? de salinidad. El sobrenadante(10000xg 15 min) de homogenato de hepatopáncreas (Tris-HCl 50 mM, pH 8.0) (4 mlx g de tejido-1) se utilizó como fuente de enzima para: a) realizarun zimograma inicial, b) realizar purificación parcial. Zimograma: luego deelectroforesis en 12% SDS PAGE, se incubó el gel en solución de almidón (1% w/v,pH 6.0, 90 min) y se tiñó con lugol 10 mM. El zimograma inicial mostró laexistencia en hepatopáncreas de cinco formas de amilasa entre 26-36 kDa con unade 29 kDa de mayor actividad. Para la purificación parcial, el sobrenadante sesometió a precipitación diferencial con (NH4)2SO4,y el dializado correspondiente se cargó en columna FPLC. Las fraccionesobtenidas con mayor actividad de amilasa se juntaron (pool B) y se realizó unzimograma y determinación de parámetros cinéticos para la hidrólisis de almidóny glucógeno.El zimograma mostró que el pool B contuvo principalmente la forma conmayor actividad (29 kDa). Se estudió el efecto de distintas concentraciones dealmidón o glucógeno (0.15-15 mg ml-1) en buffer fosfato 50 mM (pH 5.2) a 30ºC sobrela actividad correspondiente al pool B. Esta fracción exhibió cinéticaMichalelis-Menten (Almidón: Km= 1.24 mg.ml-1; Glucógeno: Km= 16.19mg.ml-1). Los resultados muestran la existencia de varias formas deamilasa en hepatopáncreas de N.granulatay sugieren la capacidad de N. granulatapara la degradación inicial de sustratos glucogénicos de diferentes fuentes. Trabajoinédito.