DETECCIÓN DE GLICOPROTEÍNAS DIFERENCIALES EN UNA MUTANTE DE LA PROTEASA RHOII EN LA HALOARQUEA HALOFERAX VOLCANII

FOLTRAN, RB; DE CASTRO, RE; GIMENEZ, M.I.

Encuentro; X Encuentro Biólogos En Red; 2015

Las proteasas romboides son proteínas integrales de membrana representadas en lostres Dominios de la vida. Con el fin de comprender su rol en las arqueas se generó unamutante nula en el gen rhoII que codifica para un homólogo de proteasas romboides, en laarquea halófila Haloferax volcanii. La cepa obtenida (MIG1) presentó dos bandasdiferenciales en geles de poliacrilamida (SDS-PAGE) correspondientes a glicoproteínas,identificadas como la glicoproteína de la capa S (GCS) y un transportador de la familiaABC.La GCS ha sido caracterizada como modelo de glicosilación de proteínas en haloarqueasy se ha propuesto que modificaciones en su glicosilación participarían en la adaptación almedio salino en H. volcanii. Si bien los oligosacáridos previamente reportados seencontraban presentes en la cepa parental y en MIG1, un oligosacárido nuevo descriptoen el marco de este proyecto, se encontró truncado en la cepa mutante, sugiriendo queRhoII podría cumplir un rol en la N-glicosilación proteica en H. volcanii. Para determinar sila mutación produce un efecto sobre la glicosilación de otras proteínas además de GCS,se enriquecieron muestras correspondientes a extractos celulares (EC) y medio de cultivolibre de células (MC) de ambas cepas mediante cromatografía de afinidad enConcanavalina A ?Sepharosa. Las proteínas eluídas de la columna fueron comparadasmediante SDS-PAGE. En las dos cepas se observaron proteínas retenidas por la columnade aproximadamente 90, 25y 27 kDa para los EC y 29, 31 y 35 kDa para MC que, por susPM, corresponderían a glicoproteínas no descriptas previamente. Algunas de estasproteínas se enriquecieron diferencialmente sugiriendo que su glicosilación tambiénpodría estar afectada en MIG1. La identificación y análisis de dichas glicoproteínas resultade interés para establecer el efecto de la mutación rhoII en la glicosilación de proteínas enH. volcanii.Financiado por UNMDP y CONICET.