Extractos polifenolicos de papas andinas presentan actividad antioxidante y citotóxica en células de hepatocarcinoma humano in vitro

MARTINEZ M.J.; BARBINI ML; ANDREU A. B.

Mar del Plata

Encuentro; IX. ENCUENTRO BIÓLOGOS EN RED 2014 (BER2014); 2014

Asociación de Jóvenes investigadores en Formacion

Los polifenoles son metabolitos secundarios sintetizados por las plantas, cuyo función es protegerlas tanto de estreses bióticos como abióticos. El interés en estos compuestos surge a partir de su caracterización como agentes beneficiosos para la salud humana. El hepatocarcinoma es uno de los tipos de cáncer más frecuentes y esta asociado a una alta mortalidad. El estudio de compuestos de origen vegetal se basa en su posible utilización como agentes quimiopreventivos y antitumorales. El objetivo de este trabajo es estudiar las actividades antioxidantes y citotóxicas de extractos de papas andinas sobre células de hepatocarcinoma. Se realizaron extractos metanólicos del tubérculo de la variedad CL658. Se cuantificó el contenido de: ac. fenólicos, antocianinas y flavan-3-oles y se midió la actividad antioxidante. Se caracterizaron los compuestos por HPLC. La actividad citotóxica se ensayó en 3 líneas celulares de hepatocarcinoma: HepG2, Hep3B y Huh7, incubadas por 24 hs con distintas concentraciones de los extractos (25-400 µgEq. ac. clorogénico/mL). Se observaron alteraciones morfológicas por microscopía de contraste de fase y microscopia electronica de transmision. Se midió la viabilidad celular por el ensayo de MTS y tinción con azul tripan. Se determinó apoptosis por tinción con bromuro de etidio/naranja de acridina y citometría de flujo. Se midieron los niveles totales de proteínas de la familia de Bcl-2. Las concentraciones de cada grupo fueron: 0,88±0,09 mg ac.clorogénico eq./gPF ác.fenólicos totales; 0,11±0,02 mg. cianidin-3-glu eq/gPF antocianinas totales; 0,06±0,02 mg catequina eq./gPF flavan-3-oles totales, y actividad antioxidante 1, 03±0,04 mg trolox eq/gPF. El ác. clorogénico resultó ser el ácido fenólico mayoritario y la pelargonidina la antocianina en mayor proporción. Se detectó citotoxicidad y las CC50 fueron: HepG2 103,34 µg/mL; Hep3B 60,48 µg/mL; Huh7 124,97 µg/mL. Se observaron alteraciones morfológicas típicas de la apoptosis, tanto por microscopia de contraste de fases como por microscopía electrónica. Se observaron aumentos significativos en la mortalidad de las células tratadas (tinción con azul tripán y tinción con bromuro de etidio/naranja de acridina) y aumentos en los porcentajes de células apoptóticas tempranas. Se obtuvieron variaciones en los niveles de expresión la familia de Bcl-2 (Bax, Bcl-x, Bcl-2). La actividad citotóxica de los extractos polifenólicos de CL658 estaría ejercida por activación de la apoptosis.