Efecto del Método de Colecta Seminal sobre la composición proteica del Plasma Seminal Ovino

LEDESMA, A; CESARI, A; GIL, J; HOZBOR, F

Buenos Aires

Jornada; IV Jornadas Internacionales del Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal; 2014

Facultad de Ciencias Veterinarias, UBA

La criopreservación de semen ovino afecta la calidad espermática ocasionando en un elevado número de células capacitación prematura y muerte celular. Se ha descrito que el plasma seminal (PS) evita y/o revierte el daño causado por la criopreservación. El PS contiene proteínas de bajo peso molecular que se adhieren a la membrana espermática. Entre estas proteínas RSVP14 y RSVP20 (Ram seminal vesicles proteins) son responsables del efecto crioprotector del PS. Hemos desarrollado un protocolo para separar la fracción de proteínas del PS que interactúa con las proteínas de la membrana plasmática de los espermatozoides (fracción retenida, FR) y observamos que el agregado del conjunto de proteínas contenidas en la FR a espermatozoides criopreservados mejoró su ultraestructura y mantuvo su movilidad pos-descongelación. Por otro lado, reportamos que el método de colecta seminal vagina artificial (VA) o electroeyaculador (EE) afecta tanto la calidad del eyaculado como la composición del PS. El uso de EE permite obtener eyaculados con una mayor concentración de proteínas de bajo peso molecular (crioprotectoras) que los colectados con VA. El objetivo de este trabajo fue determinar si existen diferencias en la concentración y composición de las FR obtenidas de eyaculados colectados con VA y EE. Los eyaculados fueron obtenidos de 4 carneros mediante el uso de VA y EE en otoño. Se formaron pooles por método y semana de colecta y se obtuvo la FR correspondiente a cada método. Los pooles de eyaculados fueron lavados y centrifugados para eliminar el PS, el pellet de espermatozoides fue incubado con buffer glicina-HCl 1M (pH 3) y nuevamente centrifugado para recuperar el sobrenadante (FR). Posteriormente se determinó la concentración de proteínas y se analizó su composición y posterior inmunodetección de RSVP14 y RSVP20. La concentración de proteínas contenidas en las FR no fue afectada por el método de colecta. Dos proteínas de bajo peso molecular (12; 29 kDa) estuvieron aumentadas en la FR obtenida con EE. Tanto RSVP14 como RSVP20 estuvieron presentes en ambas FR. El método de colecta seminal modifica la composición proteica de la FR del PS ovino. La electroestimulación permite obtener eyaculados con mayor concentración de proteínas de bajo peso molecular lo cual podría ser beneficioso para conservar la calidad del semen ovino criopreservado.