La falta de aminoácidos en el medio de cultivo de hepatocitos de ratón, induce la selección de células preneoplásicas.

A. CHISARI; SANCHO, P.; CAJA, L.; BERTRAN, E.; FABREGAT, I.

Mar del Plata

Congreso; LVI Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica, IV Congreso Regional por el Bienestar animal de laboratorio y el progreso de la ciencia y Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Fisiología.; 2011

SAIC-AACYTAL-SAFISIOL

La malnutrición proteica es un cuadro clínico causado por un desequilibrio entre la ingesta de proteínas y las necesidades metabólicas básicas. La ingesta de dietas carentes de proteínas, alternadas con realimentación normal (20%) aumentó la incidencia de lesiones tempranas en carcinogénesis química en hígado de rata. El objetivo de este trabajo es estudiar la muerte, proliferación y supervivencia de hepatocitos de ratón inmortalizados incubados con medio de cultivo carente de aminoácidos (Aa) y su relación con la generación de células preneoplásicas en el hígado. La incubación en medio sin Aa durante 12, 24 y 48 h significó una disminución de la viabilidad celular (incorporación de H3-timidina) que se correlacionó con una mayor apoptosis (evaluando actividad de caspasa-3). Se seleccionó una subpoblación de células capaz de sobrevivir a la falta de Aa (Sel) que resultó más proliferativa, más resistente a la muerte inducida por TGF-β y presentó menos apoptosis comparada con la línea parental (Par). Se evaluó mediante western-blot los niveles de proteínas que participan en las vías de señalización de resistencia a apoptosis: Akt, ERKs, mTOR/GSK-3 y EGFR. En las células Sel los niveles de fosfo-AKT y fosfo-ERK se incrementaron significativamente (p≤0,05) en comparación con la Par. Esto a su vez se correlacionó con un aumento (p≤0,05) de la activación de la vía EGFR/SRC en las Sel (p≤0,05). Además, las células Sel mostraron mayores niveles (p≤0,05) de fosfo-p70S6 y fosfo-GSK (sustratos downstream de mTOR=mammalian Target Of Rapamycin,), en comparación con las Par. Los resultados presentados indican que es posible aislar una subpoblación de hepatocitos capaz de sobrevivir en ausencia de Aa y que muestran una mayor capacidad para proliferar y sobrevivir escapando de la muerte inducida por la privación aminoacídica de manera análoga a lo que se observa en células preneoplásicas.