INVESTIGADORES
MORCELLE DEL VALLE Susana Raquel
congresos y reuniones científicas
Título:
Proteasas de látex de frutos de Araujia hortorum Fourn. (Asclepiadaceae).
Autor/es:
PRIOLO, N.; OBREGÓN, D.; MONGIARDINI, E.; MORCELLE, S.; ARRIBÉRE, M. C.; CAFFINI, N.
Lugar:
Córdoba, Argentina
Reunión:
Congreso; Proteasas de látex de frutos de Araujia hortorum Fourn. (Asclepiadaceae).; 1997
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Bioquímica y Biología Molecular
Resumen:
El látex obtenido por incisiones de frutos de Araujia hortorum Fourn. (Asclepiadaceae), recogido sobre buffer fosfatos 0,1 M (pH 6,5) conteniendo EDTA y cisteína 5 mM, centrifugado inicialmente a 16000g a 4ºC durante 30 minutos y posteriormente ultracentrifugando el sobrenadantea 100.000g a 4ºC durante 60 minutos, produjo un extracto crudo que contiene enzimas proteolíticas. El extracto crudo mostró notoria actividad proteolítica sobre caseína como sustrato, alcanzando su máximo a pH 8,0-9,0 en presencia de cisteína 12 mM. La preparación enzimática fue total e irreversiblemente inhibida por E-64 (8 mM) y de modo reversible por Cl2Hg (0,1 mM) revelando que las enzimas en estudio pertenecen a la familia de las proteasas cisteínicas. Mediante isoelectroenfoque (IEF) se comprobó que la mayoría de las proteasas presentes en el extracto crudo son de pI elevado. Por consiguiente, el mismo fue purificado por cromatografía de intercambio catiónico (CM Sepharose CL-6B Fast Flow, buffer de elución ácido cítrico-fosfato de sodio 55 mM de pH 6,4, gradiente de NaCl 0,2-0,45 M). se obtuvieron dos fracciones proteolíticamente activas, cada una de las cuales fue posteriormente cromatografiada a través de SP Sepharose HP utilizando el mismo buffer y dos gradientes de fuerza iónica diferentes (0,2-0,5 M y 0,2-0,8 M, respectivamente). Las principales fracciones proteolíticamente activas son de naturaleza básica (pI mayores que 9,3, IEF) y homogéneas por electroforesis nativa. El análisis mediante SDS-PAGE reveló que las fracciones activas tienen una masa molecular relativa de 25 y 29 kDa, lo que concuerda con la información existente sobre otras proteasas de Asclepiadaceae.