Caracterización de una proteasa extraída del látex de Araujia hortorum Fourn. (Asclepiadaceae)

MORCELLE DEL VALLE, S.; OBREGÓN, W.; MONGIARDINI, E.; CONFORTI, P.; LIGGIERI, C.; PRIOLO, N.; CAFFINI, N.

Mendoza, Argentina

Congreso; XXXIV Reunión de la Sociedad Argentina de Bioquímica y Biología Molecular; 1998

Sociedad Argentina de Bioquímica y Biología Molecular (SAIB)

Del látex de frutos de Araujia hortorum Fourn. (Asclepiadaceae) se obtuvo, mediante ultracentrifugación a 100.000g, un extracto crudo conteniendo enzimas proteolíticas que se purificaron por cromatografía de intercambio catiónico (CM Sepharose CL-6B Fast Flow, buffer de elusión ácido cítrico-fosfato de sodio 55 mM de pH 6,4, gradiente de NaCl 0-0,6 M), obteniéndose dos fracciones importantes caseinolíticamente activas. La primera de las fracciones con actividad proteolítica, araujiaína h I, fue seleccionada en esta oportunidad para su caracterización. Mediante SDS-PAGE e IEF pudo comprobarse la homogeneidad de la misma, siendo la masa molecular relativa de 24 kDa y el pI superior a 9,3. mostró máxima actividad caseinolítica en un rango de pH comprendido entre 8,0 y 8,5 en presencia de cisteína 12 mM, y fue irreversiblemente inhibida pro E-64 y de modo reversible por Cl2Hg, demostrando así que pertenece a la familia de las proteasas cisteínicas. Además, el perfil cromatográfico fue idéntico en presencia de Cl2Hg. Frente a la acción de la temperatura, se evidenció una gran conservación de la actividad caseinolítica, aún a 70ºC, durante un prolongado lapso de tiempo (comportamiento similar al del extracto crudo). La medición de la actividad esterásica se llevó a cabo sobre sustratos sintéticos del tipo N-carbobenzoxi-p-nitrofenil ésteres de aminoácidos. Estas determinaciones revelaron una mayor preferencia por el derivado de glutamina y en orden decreciente por los derivados de ácido aspártico, lisina, glicina, asparragina, leucina, triptofano, tirosina, fenilalanina, alanina, valina y prolina.