INVESTIGADORES
MORCELLE DEL VALLE Susana Raquel
congresos y reuniones científicas
Título:
Perfil proteolítico del látex de Funastrum clausum (Jacq.) Schlecht. (Asclepiadaceae)
Autor/es:
MORCELLE DEL VALLE, S. R.; PRIOLO, N.; CORTADI, A.; CAFFINI, N. O.
Lugar:
Mendoza, Argentina
Reunión:
Congreso; XXXV Reunión Anual; 1999
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Investigación en Bioquímica y Biología Molecular (SAIB)
Resumen:
El látex de Funastrum claussum (Jacq.) Schlecht. (Asclepiadaceae) contiene abundante cantidad de enzimas proteolíticas. Las mismas fueron detectadas mediante ensayos histoquímicos in situ, realizados en cortes transversales frescos de tallos de acuerdo al método del film-sustrato de Fratello. Por medio de incisiones superficiales de órganos vegetativos aéreos, se obtuvo el látex de aspecto blanquecino que se recibió en buffer fosfatos 0,1 M de pH 6,5 conteniendo EDTA y cisteína 5 mM, como protectores. Mediante centrifugación a 16.000´g durante 30 minutos se separaron restos insolubles y se obtuvo un sobrenadante conteniendo las proteasas que constituyó el denominado extracto crudo. Este extracto crudo mostró marcada actividad caseinolítica en el rango de pH 8,0-8,5 y en presenci ad ecisteína 12 mM. Las proteasas se purificaron por cromatografía de intercambio catiónico (CM Sepharose CL-6B Fast Flow, buffer de elución ácido cítrico-fosfato de sodio 55 mM de pH 6,6, gradiente de NaCl 0,2-0,7 M) obteniéndose tres fracciones proteolíticamente activas, una de ellas eluye antes de aplicar el gradiente salino. La fracción que eluyó en último lugar fue total e irreversiblemente inhibida por E-64 y de modo reversible por Cl2Hg, evidenciando que pertenece a la familia de las proteasas cisteínicas. La masa molecular obtenida mediante SDS-PAGE fue de 24 kDA y el pI (IEF) superior a 9,3.
