Origen y desarrollo de laticíferos y localización citoquímica de proteasas del látex de Funastrum clausum (Jacq.) Schlecht. (Asclepiadaceae)

CORTADI, A.; GATTUSO, S; MORCELLE DEL VALLE, S.; PRIOLO, N.; CAFFINI, N.

Rosario, Santa Fe, Argentina

Congreso; XIX Reunión anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 1999

Sociedad de Biología de Rosario

Las enzimas proteolíticas son aún muy usadas en diferentes preparaciones farmacéticas. Aunque las proteasas están frecuentemente presentes en plantas con laticíferos, no todas las especies que contienen látex son buenas productoras de enzimas proteolíticas. En el presente trabajo se determinó el origen y desarrollo de laticíferos y la localización histoquímica de proteasas en el látex de Funastrum clausum (Jacq.) Schlechter (Asclepiadaceae). Se trabajó con material fresco y fijado en FAA. Se realizaron cortes transversales y longitudinales de semillas inmaduras y plántulas con micrótomo de deslizamiento. La coloración empleada fue hematoxilina-eosina. Las enzimas son detectadas in situ por ensayos histoquímicos hechos en secciones transversales de tallos frescos acorde al método film-sustrato de Fratello. Las iniciales de los laticíferos están diferenciadas ya en el embrión, distribuidas en un anillo irregular de células que se encuentran directamente debajo del ápice embrional. La naturaleza de su crecimiento y ramificación sugiere que el extremo de las iniciales de los laticíferos exhibe un crecimiento intrusivo. La localización citoquímica se evidencia a través de la actividad proteolítica a través de la aparición gradual de colores, púrpura, azul y blanco por la digestión de las capas coloreadas del film. El látex obtenido por incisiones superficiales de tallos fue recogido sobre buffer fosfatos o,1 M (pH 6,5) conteniendo EDTA 5 mM y cisteína 5 mM a 0-4°C, homogeneizado y centrifugado a 16.000g durante 30 minutos. Los extractos crudos muestran remarcable actividad proteolítica sobre cseína: la máxima actividad fue encontrada a pH 8,0-8,5 con cisteína 12 mM. Los mismos fueron purificados por precipitación acetónica fraccionada seguido de cromatografía de intercambio catiónico (CM Sepharose CL-6B; con buffer de elución ácido cítrico-fosfato de sodio pH 6,6 y un gradiente de NaCl 0-0,6 M). Obteniéndose dos fracciones proteolíticamente activas, básicas, ambas homogéneas con SDS-PAGE con similares masas moleculares (25 y 26 kDa).