INVESTIGADORES
MORCELLE DEL VALLE Susana Raquel
congresos y reuniones científicas
Título:
Aplicación de nuevas fitoproteasas en la síntesis de péptidos bioactivos
Autor/es:
MORCELLE DEL VALLE, SUSANA
Lugar:
San Carlos, Brasil
Reunión:
Congreso; VIII Jornadas de Jóvenes Investigadoers del Grupo Montevideo; 2000
Institución organizadora:
Asociación de Universidades del Grupo Montevideo
Resumen:
A partir del látex de especies pertenecientes a la familia Asclepiadaceae se han aislado enzimas proteolíticas a fin de ser ensayadas en la síntesis de péptidos bioactivos. En general, la mayoría de los procesos de catálisis enzimática son llevados a cabo en soluciones acuosas. Sin embargo muchos productos de reacción no pueden obtenerse en medio acuoso por distintas razones; insolubilidad de sustratos, equilibrio termodinámico desfavorable, inhibición de la actividad enzimática debida a reactivos o productos o dificultad para recuperar estos últimos. Estas dificultades pueden evitarse utilizando solventes orgánicos como medio de reacción, tanto en sistemas monofásicos como bifásicos, o bien inmovilizando la enzima en un soporte sólido. En consecuencia, se estudio la estabilidad en diferentes medios orgánicos y el comportamiento en forma inmovilizada en geles de poliacrilamida de las proteasas obtenidas a partir del látex de Araujia hortorum Fourn., Morrenia brachystephana Griseb. Morrenia odorata (Hook et Arn.) Lindley y Funastrum clausum (Jacq.) Schlechter. Hasta el momento, se ensayaron sistemas conteniendo N,N-dimetilformamida, acetonitrilo, hexano, heptano y cloroformo. Las enzimas estudiadas exhibieron distinto comportamiento en los diferentes medios utilizados. La mayoría de las fitoproteasas ensayadas manifestaron ser estables en sistemas monofásicos conteniendo N,N-dimetilformamida o acetonitrilo, reteniendo hasta un 90% de actividad enzimática residual luego de 60 minutos de incubación. En medios bifásicos con diferentes proporciones de heptano o hexano algunas de estas enzimas (morrenaína b I, morrenaína b II y morrenaína o II) son altamente estables, reteniendo el 98%, 89% y 80% de actividad residual luego d e1 h de incubación respectivamente. Sin embargo, morrenaína b II y morrenaína o II en cloroformo reducen su actividad a menos de un 10% leugo de 60 min de incubación. Todos los ensayos se realizaron a 40°C y la actividad enzimática se determinó utilizando caseína al 1% en buffer Tris-HCl 0,1 M de pH 8,0 como sustrato a 45°C y en presencia de cisteína 12 mM. Con las proteasas de Araujia hortorum se ensayó la síntesis de un derivado peptídico a partir de NCBZ glutamina y PheOMe como sustratos en hexano:buffer Tris HCl pH 8 (50:50) en presencia de 2 mercaptoetanol. Por HPLC se observa la aparición de un pico con tR:5,3 que no aparece en el blanco. Por otra parte, las fitoproteasas fueron entrampadas en geles de poliacrilamida al 8% y 14%, determinándose la actividad caseinolítica en funcion del tiempo. Se observó que la actividad aumenta sostenidamente, al menos hasta 6 h de estar en contacto con el sustrato.