INVESTIGADORES
MORCELLE DEL VALLE Susana Raquel
congresos y reuniones científicas
Título:
LOCALIZACIÓN CITOQUÍMICA Y AISLAMIENTO DE PROTEASAS A PARTIR DE LÁTEX DE FUNASTRUM CLAUSUM (ASCLEPIADACEAE)
Autor/es:
MORCELLE DEL VALLE, S.R.; PRIOLO, N.; CORTADI, A.
Lugar:
Punta del Este, Uruguay
Reunión:
Congreso; XI Reunión Latinoamericana de Fisiología Vegetal, XXIV Reunión Argentina-Congreso Uruguayo de Fisiología Vegetal; 2002
Institución organizadora:
SAFV
Resumen:
Las proteasas presentes en el látex de Funastrum clausum (Jacq.) Schlechter (Asclepiadaceae) fueron detectadas mediante ensayos histoquímicos in situ, realizados en cortes longitudinales frescos de tallos de acuerdo al método de Denker y transversales según el de Fratello. En el primer caso, los cortes congelados se incubaron sobre una película de gelatina y luego se tiñeron con azul de toluidina. En el otro caso los cortes fueron puestos directamente sobre una película color procesada, no expuesta y luego incubada. La localización de los laticíferos se evidenció por una reacción citoquímica debida a la digestión proteolítica de las capas de gelatina. El látex se recogió en buffer fosfatos 0,1 M (pH 7,5) con EDTA y cisteína y se centrifugó a 16.000xg durante 120 min. Los ensayos proteolíticos se hicieron con caseína y azocaseína como sustratos en presencia de cisteína. Mediante cromatografía de intercambio iónico por FPLC se purificaron dos fracciones activas utilizando DEAE Sepharose CL-6B pH 7,5; gradiente de NaCl 0-0,3 M y SP Sepharose CL-6B pH 6,5, gradiente de NaCl 0-0,4. La mayor actividad proteolítica se obtuvo a pH alcalino. Los pI de las proteasas presentes fueron mayores a 9,3 y sus masas moleculares semejantes (SDS-PAGE).