ESTABILIDAD EN MEDIOS NO CONVENCIONALES E INMOVILIZACIÓN EN GELES DE POLIACRILAMIDA DE NUEVAS FITOROTEASAS PARA SU USO EN LA SÍNTESIS DE PÉPTIDOS BIOACTIVOS

ARRIBÉRE, M.C.; MORCELLE DEL VALLE, S. R.; LIGGIERI, C.; CONFORTI, P.; CAFFINI, N. O.; PRIOLO, N. S.

Urbino, Italia

Congreso; IX Congreso Italo-latinoamericano de etnomedicina “Julio Samper Vargas”; 2000

Comité Latinoamericano de Etnomedicina

ESTABILIDAD EN MEDIOS NO CONVENCIONALES E INMOVILIZACIÓN EN GELES DE POLIACRILAMIDA DE NUEVAS FITOROTEASAS PARA SU USO EN LA SÍNTESIS DE PÉPTIDOS BIOACTIVOS   María Cecilia Arribére, Susana Morcelle del Valle, Constanza Liggieri, Paula Conforti, Néstor Caffini y Nora Priolo   Laboratorio de Investigación de Proteínas Vegetales (LIPROVE), Depto. de Cs. Biológicas, Fac. de Cs. Exactas, UNLP. Argentina. E-mail: priolo@biol.unlp.edu.ar   A partir del látex de especies pertenecientes a la familia Asclepiadaceae se han aislado enzimas proteolíticas a fin de ser ensayadas en la síntesis de péptidos bioactivos. En general, la mayoría de los procesos de catálisis enzimática son llevados a cabo en soluciones acuosas. Sin embargo muchos productos de reacción no pueden obtenerse en medio acuoso por distintas razones: insolubilidad de los sustratos, equilibrio termodinámico desfavorable, inhibición de la actividad enzimática debida a reactivos o productos o dificultad para recuperar estos últimos[1]. Estas dificultades pueden evitarse utilizando solventes orgánicos como medio de reacción, tanto en sistemas monofásicos como bifásicos, o bien inmovilizando la enzima en un soporte sólido. En esta oportunidad comunicamos los resultados acerca de la estabilidad en diferentes medios orgánicos y el comportamiento en forma inmovilizada en geles de poliacrilamida de las proteasas obtenidas a partir del látex de Araujia hortorum Fourn., Morrenia brachystephana Griseb., Morrenia odorata (Hook et Arn) Lindley y Funastrum clausum (Jacq.) Schlechter. Se utilizaron sistemas conteniendo N,N-dimetilformamida, acetonitrilo, hexano, heptano y cloroformo. Las enzimas estudiadas exhibieron distinto comportamiento en los diferentes medios utilizados. La mayoría de las fitoproteasas ensayadas manifestaron ser estables en sistemas monofásicos conteniendo  N,N-dimetilformamida o acetonitrilo, reteniendo hasta un 90% de actividad enzimática residual luego de 60 min de incubación. En medios bifásicos con diferentes proporciones de heptano o hexano algunas de estas enzimas (morrenaína bI, morrenaína bII y morrenaína o II) son altamente estables, reteniendo el 98%, 89% y 80% de actividad residual luego de 1h de incubación, respectivamente. Sin embargo, morrenaína bII y morrenaína o II en cloroformo reducen su actividad a menos 10% luego de 60 min de incubación. Todos los ensayos se realizaron a 40ºC y la actividad enzimática se determinó utilizando caseína al 1% en buffer Tris-HCl 0,1 M de pH 8,0 como sustrato, a 45ºC y en presencia de cisterna 12 mM. Por otra parte, las fitoproteasas fueron entrampadas en geles de poliacrilamida al 8%, y 14%, determinándose la actividad caseinolítica en función del tiempo. Se observó que la actividad aumenta sostenidamente, al menos hasta 6h de estar en contacto con el sustrato. Los resultados obtenidos ponen de manifiesto que estas fitoproteasas podrían ser aplicadas como biocatalizadores en la síntesis de péptidos en medios no convencionales. [1] Barros, M.T., G.V. Carvalho, F.A.P. García and E.M.V. Pires (1992) Stability Performance of Cynara cardunculus L. Acid protease in aqueous-organic biphasic systems. Biotechnology Letters 14, 179-184.