Marcadores moleculares neutros para la caracterización de Aspergillus fumigatus aislados de alimentos para animales en Argentina.

G PENA, ; I COELHO,; V ALONSO, ; C AMINAUEL, ; A FOCHESATO, ; CAR ROSA,; L CAVAGLIERI.

Congreso; VII Congreso Latinoamericano de Micología; 2014

Soc Latinoamericana de Micología

MARCADORES MOLECULARES NEUTROS PARA LA CARACTERIZACIÓN DE ASPERGILLUS FUMIGATUS AISLADOS DE ALIMENTOS PARA ANIMALES EN ARGENTINA Gabriela Pena1, 3, Irene Coelho2, 7, Verónica Alonso1, 4, Carla Aminauel1, 5, Analía Fochesato1, 7, Carlos A da Rocha Rosa2, 8,Lilia Cavaglieri1, 9 1Cátedra Micología. Departamento de Microbiología e Inmunología, Facultad de Ciencias Exactas, Físico-Químicas y Naturales, Universidad Nacional de Río Cuarto. Ruta 36 Km. 601, (5800) Río Cuarto, Córdoba, Argentina. 2Departamento de Microbiologia e Imunología Veterinária. Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro. Instituto de Veterinária. Rodovia BR 465 Km 7, Seropédica, Rio de Janeiro. 23890-000. Brazil. Correos electrónicos: 3; 4; 5; 6; 7; 8; 9 En este trabajo se evaluaron cepas A. fumigatus sensu lato (identificados en base a caracteres morfológicos y fisiológicos) mediante marcadores moleculares neutros como el PCR-RFLP y RAPD para la confirmación de su estado taxonómico a nivel de especie y la estimación de su variabilidad genética. A partir de 143 cepas de A. fumigatus sensu lato aisladas de diferentes alimentos para animales en Argentina, se seleccionaron 35 que fueron caracterizadas mediante PCR-RFLP. Se utilizó la enzima de restricción BccI para la digestión de los amplicones benA (β-tubulina) y los fragmentos obtenidos se resolvieron en geles de agarosa al 1,5%. El patrón genético originado fue idéntico a los controles positivos A. fumigatus sensu stricto RC2063 y RC2108. Seguidamente, las mismas 35 cepas caracterizadas mediante PCR-RFLP y otras 35 que incluyeron cepas aisladas de alimentos para animales y casos clínicos de aspergilosis humana y animal en Brasil, fueron evaluadas mediante el marcador RAPD utilizando los cebadores arbitrarios PELF y URP1F. Se observó un patrón genético similar entre todas las cepas de A. fumigatus analizadas. Luego del análisis de clusters, todas las cepas conformaron un mismo grupo y se agruparon con elevado valor de soporte estadístico (99%) con las cepas de referencia A. fumigatus sensu stricto CBS 127.801 y CBS 127.278, independientemente de su origen de aislamiento y región geográfica (Argentina o Brasil). Además, presentaron una similitud genética del 78% evidenciando variabilidad genética a nivel intraespecífico. Finalmente, el secuenciamiento del gen benA de cepas seleccionadas permitió confirmar definitivamente que pertenecen a la especie A. fumigatus sensu stricto. Los resultados de este trabajo sugieren que las cepas involucradas en la aspergilosis humana y animal procederían del ambiente animal en donde A. fumigatus sensu stricto es frecuentemente encontrado. Los trabajadores rurales y los animales estarían constantemente expuestos. Palabras clave: A. fumigatus sensu stricto, PCR-RFLP, RAPD, identificación fúngica, variabilidad genética.